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人肺腺癌A549细胞株E-cadherin基因甲基化及尿多酸肽干预的研究的开题报告

一、研究背景和意义：

人类肺腺癌是一种高度恶性的肿瘤，其发病率和死亡率逐年上升。E-钙黏蛋白(E-cadherin)是一种细胞质膜上的黏附蛋白。许多研究表明，E-cadherin的表达与肺癌转移有关。因此，研究E-cadherin调控肺癌转移的机理具有重要的价值。嗜多胺肽是一种生物活性的多胺化合物，在生物体内发挥了许多生理作用。最近的研究表明，嗜多胺肽具有抑制多种人类肿瘤细胞生长和侵袭的作用，但其在肺腺癌细胞中的作用机制尚不清楚。因此，本研究将研究E-cadherin基因启动子甲基化与注射尿多酸肽干预对人肺腺癌A549细胞株生长和侵袭的影响，以期为肺癌的治疗提供新的靶点。

二、研究方法：

1.细胞培养:选用人肺腺癌A549细胞株进行研究，利用无菌技术在含有10％FBS的DMEM培养基中培养细胞，维持在37℃的CO2培养箱中；

2.建立甲基化和未甲基化E-cadherin基因的表达载体：将E-cadherin基因启动子序列分别克隆到pGL3–Basic和pCMV-Tag2B表达载体中，构建甲基化和未甲基化的E-cadherin基因表达载体；

3.转染：将分别含有甲基化和未甲基化E-cadherin基因表达载体的细胞进行转染，采用荧光定量PCR法检测E-cadherin基因的表达；

4.注射尿多酸肽：用不同浓度的尿多酸肽处理转染过的A549细胞，利用酶标仪检测细胞活性、缺陷细胞浸润能力和膜黏附能力。

三、预期结果：

1.甲基化会抑制E-cadherin基因的表达，影响肺癌细胞的黏附性和侵袭力；

2.尿多酸肽注射可提高E-cadherin的表达，抑制人肺腺癌A549细胞的生长和侵袭能力；

3.尿多酸肽注射可阻断甲基化作用，恢复E-cadherin基因的表达。

四、研究意义：

本研究对人类肝腺癌的治疗提供了新的思路和靶点，同时也为了解多胺肽对肺腺癌的作用机制提供了一定的依据。