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水飞蓟素前体脂质体的制备及生物利用度考察
水飞燕素是提取自中医水飞燕中发现的有效部位，包括水飞燕斌、水飞燕宁、水飞燕亭和亚水飞燕斌。最重要的活性成分是水飞燕斌。经药理和毒理研究表明水飞蓟素具有明显的保肝及稳定肝细胞膜作用,对各种毒物引起的肝脏损害有不同程度的保护和治疗作用。但由于它难溶于水,脂溶性也差,口服生物利用度低,近年来,提高水飞蓟素生物利用度的制剂研究较多,如水飞蓟素-环糊精包合物,水飞蓟素固体分散体,水飞蓟宾-葡甲胺盐,水飞蓟宾-二偏琥珀酸酯钠盐和水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物等,但未见前体脂质体方面的报道本研究将水飞蓟素制成用于口服给药的前体脂质体,并以水飞蓟宾的含量为指标测定水飞蓟素前体脂质体的大鼠生物利用度和药代动力学。
材料和方法
仪器
药物和试剂
动物
测定了飞泻素含量的建立
前体脂质水体的制备
前体脂质体重组
脂质体标准曲线计算浓度的合成
精密称取前体脂质体粉末0.5g于10mL量瓶中,用流动相定容,超声使其完全溶解,取20μL进样,所得峰面积代入标准曲线计算浓度(A),同时另取前体脂质体粉末0.5g加水10mL,重组后过0.45μm的微孔滤膜,取滤液2mL置10mL量瓶中,用流动相定容,超声使其完全溶解,取20μL进样,所得峰面积代入标准曲线计算浓度(B)。按EE%=100×5B/A计算包封率(EE),A代表总的水飞蓟素含量,B代表脂质体中水飞蓟素含量。
水提取物脂质的质量评价
前体脂质稳定性研究
采用水飞燕素前体脂质素酶分析法对大鼠体内生物利用的影响
大鼠血浆样品的处理方法
给药和样品
结果
1水飞蓟素原料成分测定结果
从图1可见,水飞蓟宾有两个同分异构体,分别为SA和SB,两峰保留时间分别在10和11min左右,SA和SB两峰之间的分离度R2.5。
选用近似流动相配比甲醇-水(体积比5.5∶4.5)配制水飞蓟素原料样品,色谱图见图2,由图可见原料中水飞蓟宾的两个同分异构体与其他成分分离良好。
水飞蓟宾含量的线性回归方程为:A=22.464C+0.0111,r=0.9999,线性范围1~115μg·mL-1。高、中、低3个浓度的平均回收率分别为99.73%,99.63%和99.05%,日内精密度RSD分别为0.44%,0.09%和0.63%,日间精密度RSD分别为0.66%,0.43%和1.38%,均符合要求,最低检测限为0.5ng·mL-1。
2水飞蓟素载体不同溶剂在无水乙醇中的溶解度不同
分别用不同的载体和溶剂制备水飞蓟素前体脂质体,并观察水飞蓟素前体脂质体的水合情况,结果发现用四氢呋喃为溶剂时,水合效果很差,一直都有不溶解的颗粒存在;用无水乙醇为溶剂时,因水飞蓟素在无水乙醇中的溶解度很小,溶解水飞蓟素所需的乙醇量很大使得制备时间很长以及成本较高;采用氯化钠、山梨醇为载体时,和甘露醇相比,在磷脂用量一定的条件下相同量的载体制备得到的产品外观很黏,不具备一定的流动性。经大量预试验,最后选用了甘露醇为载体,甲醇和乙醚的混合溶剂为制备溶剂。
3测定了飞兆素脂质体的密封率
经测定水飞蓟素脂质体包封率为(91.6±0.7)%。
4水提取物脂质的质量评价
4.1脂质体粒径分布
马尔文激光粒度测定仪测定结果显示,水飞蓟素前体脂质体水合后,93.8%的脂质体粒径398.6nm,脂质体的平均粒径为238.8nm,多分散指数为0.376。
在透射电镜下可以观察到,水合后的脂质体基本上是类椭圆状的单室脂质体。
4.2水飞蓟素脂质体的泄漏率
由释放试验结果得到,0min水飞蓟素前体脂质体的包封率为90.87%,而4h时的包封率为88.35%,通过渗漏率公式结算,4h内水飞蓟素脂质体中水飞蓟素的渗漏率为2.52%。由此可以推测,水飞蓟素脂质体在胃肠道中4h内是稳定的,药物渗漏量很少,具有良好的稳定性。
5脂质体包封率测定
3批水飞蓟素前体脂质体进行恒温加速试验,避光密闭放置3个月后,外观仍疏松、均匀、饱满,加水重建后仍能得到均匀的脂质体混悬液,粒径和包封率结果见表1。由表中结果可知,40℃放置3个月脂质体的粒径、包封率基本无变化。
6大鼠体内生物利用度分析的建立
6.1水飞蓟宾双向保留时间
在设定液相条件下,血浆中杂质不干扰样品的测定,水飞蓟宾双峰的保留时间分别为12.3和13.4min。由图4可见,水飞蓟宾双峰分离效果较好且出峰时间适宜。
6.2游离药物标准曲线
由试验可得,总药物浓度标准曲线为C=47253A+13293,r=0.9896,线性范围0.1~2.6μg·mL-1。高、中、低3个浓度的平均回收率分别为82.40%,83.49%和81.24%,日内精密度RSD分别为2.56%,3.74%和3.12%,日间精密度RSD分别为4.07%,4.83%和5.27%;游离药物标准曲线为C=4
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