基因工程中常用的酶.pptVIP

4酶切缓冲液成分：MgCl2、Tris-HCl、β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT）以及牛血清蛋白（BSA）酶活性的正常发挥，是绝对地需要二价的阳离子，通常是Mg2+。Tris-HCl的作用，在于使反应混合物的PH恒定在酶活性所要求的最佳数值的范围之内。疏基试剂对于保持某些限制酶的稳定性可能是有用的，但它同样也可能有利于潜在污染杂质的稳定性。有一部分限制酶对于钠离子或钾离子浓度变化反应十分敏感，而一部分限制酶则可适应较广的离子强度变化幅度。操作中注意事项：合适的温度；内切酶的用量不超酶切总体积的1/10第31页，讲稿共73页，2023年5月2日，星期三酶切反应酶(多数已商品化,以10u/?l溶液形式提供)反应缓冲液(以5倍或10倍母液随酶提供)反应时间:随DNA及酶用量而定,一般数小时至过夜第32页，讲稿共73页，2023年5月2日，星期三第二节DNA连接酶第33页，讲稿共73页，2023年5月2日，星期三核酸酶是“剪刀”连接酶就是“浆糊”、“胶水”第34页，讲稿共73页，2023年5月2日，星期三一.连接酶(DNAligase)在E.coli和动植物细胞中都有此酶。能催化DNA中相邻的3`-OH和5`-P之间形成磷酸二脂键。(P51)第35页，讲稿共73