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高效液相色谱法测定牛肉中的游离棉酚

作者：庞昌信

来源：《现代食品》2019年第5期

◎庞昌信

（广州市从化质量技术监督检测所，广东?广州？510925）

PangChangxin

（GuangzhouConghuaQualityTechnologySupervisionandInspectionInstitute,Guangzhou?510925,China）

摘?要:建立高效液相色谱法测定牛肉中残留的游离棉酚的检验方法。在低温条件下，以丙酮为提取剂,超声提取牛肉样品中的游离棉酚，以甲醇-2%磷酸（85：15）为流动相，外标法测定。通过试验优化其工作条件,确定本方法的检出限、线性、精密度、稳定性以及准确度，均有满意的结果。本方法是一种操作相对简单的定量测定牛肉中游离棉酚残留量的方法。

关键词：高效液相色谱;牛肉;游离棉酚

Abstract:Amethodforthedeterminationoffreegossypolinbeefbyhighperformanceliquidchromatographywasestablished.Thefreesampleofgossypolwasextractedfromthebeefsampleunderlowtemperatureconditionswithacetoneasextractant,andthemobilephasewasmethanol-2%phosphoricacid（85：15）,whichwasdeterminedbyexternalstandardmethod.Throughtheexperimenttooptimizetheworkingconditions,thedetectionlimit,linearity,precision,stabilityandaccuracyofthemethodweredetermined,andsatisfactoryresultswereobtained.Themethodisarelativelysimplemethodforquantitativelydeterminingtheamountoffreegossypolinbeef.

Keywords:Highperformanceliquidchromatography;Beef;Freegossypol

中图分类号：S816.17

棉籽饼粗蛋白质含量高,常用来作为喂养禽畜的饲料，是喂养牛常用的植物性蛋白质饲料之一。由于棉籽饼中含有有毒的棉酚，用它喂养过的牛，其肌肉组织中通常会有一定的棉酚残留，因此，对牛肉中棉酚残留量进行测定在畜牧养殖业的食品安全方面有着重大的现实意义。棉酚有结合棉酚和游离棉酚2种形式，前者没有化学活性，几乎不被动物消化吸收，所以棉酚残留量的测定基本上以后者为主。动物组织中游离棉酚的测定方法主要是紫外分光光度法和高效液相色谱法，后者比前者具有更高的灵敏度和准确度，是主要的检测方法,本研究采用二极管阵列检测器建立了高效液相色谱法,用于测定牛肉中游离棉酚的残留量［1-3］。

1?实验设计

1.1?仪器设备

LC-10A液相色谱仪（岛津制作所试验计测事业部），配备二极管阵列检测器、C18色谱柱;样品破碎机;超声波清洗机;旋转蒸发仪;高速离心机（配50mL离心管）。

1.2?试剂和样品

磷酸（色谱纯）：吸取6mL磷酸溶于300mL水中,混匀；甲醇（色谱纯）、丙酮（色谱纯）；外购棉酚标准溶液（50Ug?mL-1）,用丙酮稀释成浓度为

0.01~20ug-mL-1的系列标准溶液;蒸馏水（重蒸水）；市售新鲜牛肉。上述试剂溶液上机测定前均需经

0.45um滤膜过滤［4］。

1.3?色谱条件

色谱柱:C18色谱柱;流动相：甲醇-2%磷酸（体积比为85：15）;流速：1.0mL?min-1;柱温:常温；测定波长：235nm;进样体积:10uL［5］。

1.4?样品处理与测定

将购买的新鲜牛肉切碎后放入破碎机搅拌成匀浆，称取5g（精确到0.001g）左右的匀浆,移入50mL离心管中，加入20mL80%（体积比）的丙酮水溶液，盖好盖子,放入冰箱中冷藏浸泡1h,取出，放入超声清洗机中超声提取30min（外加冰浴），趁低温离心，上清液移入烧瓶中，用10mL上述丙酮水溶液反复提取、离心残渣两次，将离心后的上清液合并于圆底烧瓶中，于旋转蒸发仪上减压浓缩至近干,用少量流动相分数次小心地将残留物洗入5