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猪圆环病毒2型Cap和猪白介素18融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达的开题报告

一、研究背景

猪圆环病毒2型（Porcinecircovirus2，PCV2）是一种主要侵害猪的病毒，引起的疾病被称为猪圆环病（Porcinecircovirus-associateddisease，PCVAD）。猪圆环病毒属于单链DNA病毒，其基因组大小约1.7kb，包含两个重叠的开放阅读框（Openreadingframes，ORFs），ORF1编码复制酶和ORF2编码主要的外壳蛋白（Cap）。Cap蛋白是猪圆环病毒的主要免疫原，也是疫苗研发的重要靶点。

猪白介素18（Porcineinterleukin18，IL-18）是一种重要的细胞因子，可以刺激免疫细胞产生多种免疫相关蛋白，如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等。IL-18对免疫应答的调节作用使其成为一种重要的免疫调节因子。

目前，研究者采用融合蛋白的技术来提高疫苗的免疫原性和保护效果，例如将Cap蛋白和其他免疫原性物质融合，来增强它在动物体内的抗原性。因此，本研究拟将猪圆环病毒2型Cap与猪白介素18融合，利用毕赤酵母进行分泌表达，探究其在毕赤酵母中的表达情况和特性。

二、研究内容

1.构建猪圆环病毒2型Cap和猪白介素18融合基因

基于已有的猪圆环病毒2型Cap和猪白介素18基因序列，采用PCR技术扩增两个基因的DNA序列，并将它们进行重叠PCR，得到融合基因。

2.构建表达载体

将融合基因插入到毕赤酵母（Pichiapastoris）表达载体pPICZαA中，得到重组表达载体pPICZαA-Cap-IL-18。

3.转化毕赤酵母

通过电转化和膜法转化等方法将重组表达载体pPICZαA-Cap-IL-18转化到毕赤酵母中。

4.诱导表达

将转化后的毕赤酵母培养至对数生长期，添加诱导剂（例如甲醇），在一定条件下进行诱导表达。

5.对表达产物进行分析

利用SDS和Westernblot等技术对表达产物进行分析，分析其表达量、纯度以及糖基化情况等。

三、研究意义

该研究将探究猪圆环病毒2型Cap和猪白介素18融合蛋白在毕赤酵母中的表达情况和特性，为疫苗研发提供新的思路和方法。同时，该研究也可以对毕赤酵母表达系统的优化和应用提供实践和参考。