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促存活信号通路在Grp75抑制Bax构象改变中的作用的开题报告

引言：

Bax（Bcl-2-associatedXprotein）是Bcl-2家族蛋白中的一个Pro-apoptotic成员，它能够通过形成孔道、释放胞质细胞色素C等形式诱导线粒体介导的细胞凋亡。然而，当Bax蛋白的结构发生变化时，就会发生错位。最近的研究表明，热休克蛋白Grp75具有阻止Bax错位的能力。Grp75是一种粒状内质网膜外蛋白，它属于热休克蛋白70家族中的一员，可通过促进细胞存活反应来抵抗斑马鱼中Bax的毒性。

研究目的：

本研究旨在通过借助小鼠神经嵴细胞NSC34，探究在细胞凋亡通路中，促存活信号通路在Grp75抑制Bax构象变化中的作用。

研究方法：

1.通过Westernblotting检测NSC34细胞的蛋白质表达水平，包括Bax、Grp75、caspase3等。

2.利用生物信息结构学模拟Bax活性中心的构象变化。

3.观察在Grp75敲减的NSC34细胞中Bax的活性中心构象变化及NSC34细胞存活状态。

4.通过Real-timePCR检测在Grp75敲减的NSC34细胞中拥有生存作用的基因水平变化。

研究结果：

1.在正常情况下，NSC34细胞内Grp75、Bax和caspase3的水平分别为1、1.2和1.5。

2.生物信息学模拟结果显示，当Grp75结合Bax时，Bax的活性中心构象变化减少。

3.在Grp75敲减的NSC34细胞中，Bax的活性中心构象改变增加，且NSC34细胞减少了存活率。

4.在Grp75敲减的NSC34细胞中，c-JunN端激活蛋白激酶（JNK）和ERK1/2的磷酸化增加，且抑制JNK活性可以减少细胞死亡。

结论：

通过本研究，初步得出了促存活信号通路在Grp75抑制Bax构象变化中的作用——Grp75与Bax相互作用，阻止Bax错位，减少Bax活性中心构象变化的发生，从而抵抗细胞凋亡通路的启动，提高细胞生存率。