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hTERT沉默后消减文库的构建及初步分析的开题报告

一、选题背景与意义

在临床中，癌症的早期检测和治疗一直是研究的热点问题。众所周知，肿瘤细胞与正常细胞相比，具有较高的增殖、分化和恶性转化能力。hTERT（telomerasereversetranscriptase基因）是影响人体细胞自然衰老的一个重要因素，同时也是一种与肿瘤相关的基因。实验表明，hTERT基因对大多数发癌机制起着重要作用，许多癌细胞的高表达是由其显著的过表达而导致。因此，针对hTERT基因进行的研究有助于深入了解癌症的形成和发展机制，同时有望为肿瘤治疗提供新的方法和手段。

二、研究内容与方法

本文计划针对hTERT基因进行沉默后消减文库的构建及初步分析。具体步骤如下：

1.分别设计用于建立消减文库的siRNA序列，构建siRNA载体，并进行质粒的构建和扩增。

2.对靶细胞进行转染操作，筛选出沉默hTERT基因最为明显的文库。

3.对筛选出的文库进行初步分析，包括测定hTERT基因沉默率、细胞周期、增殖情况及转录组变化等参数。

三、研究预期成果

1.构建一个有效的hTERT消减文库。

2.测定hTERT基因沉默率，并初步探索沉默后细胞生物学特性变化及mRNA基因表达差异，为深入地研究hTERT基因在细胞发育和癌症发生中的作用提供有力的实验基础。

3.该研究结果具有重要的理论意义和临床应用前景，能够为肿瘤治疗提供新的思路和方法。

四、研究难点和解决思路

本研究的难点主要在于精确地设计siRNA序列，提取高质量的文库DNA，并筛选出表达最为明显的文库。为此，本文选择利用计算机软件进行序列优化和siRNA设计，并运用多种方法和手段对文库进行筛选和鉴定，如PCR扩增、酶切、电泳等。

五、研究进度安排

1.第一阶段：2021年7月~8月，进行siRNA序列设计和质粒构建，对文库构建方案进行初步探索。

2.第二阶段：2021年9月~10月，进行文库构建和转染操作等实验工作，筛选出最为优秀的文库。

3.第三阶段：2021年11月~12月，对文库进行初步分析，包括测定沉默率、生理过程和转录组变化等参数。

4.第四阶段：2022年1月~2月，撰写毕业论文，并准备参加答辩。

六、参考文献

1.Greider,C.W.(1996).Telomerelengthregulation.Annualreviewofbiochemistry,65(1),337-365.

2.Kim,N.W.,Piatyszek,M.A.,Prowse,K.R.,Harley,C.B.,West,M.D.,Ho,P.L.,Weinrich,S.L.(1994).Specificassociationofhumantelomeraseactivitywithimmortalcellsandcancer.Science,266(5193),2011-2015.

3.Yu,J.,Li,Y.,Fu,X.,Wang,Y.,Gao,J.,Lu,B.(2018).IdentificationofhTERTasanoveltargetofmiR-155inhumanlaryngealsquamouscellcarcinomaHep-2cells.Cancercellinternational,18(1),144.

4.Temime-Smaali,N.,Guittat,L.,Camerlo,J.,Perollet,D.,Amor-Guéret,M.,Riou,J.F.(2005).ImpactofDNApolymeraseandHPVontelomerelengthandintegrity.JournalofBiologicalChemistry,280(50),42866-42875.