电泳法P.电泳法p.pptVIP

主讲老师：詹伟华生物制药技术专业教学资源库电泳法

目录CONTENTS01、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法02、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法实验

SDS法PART01

SDS法是一种变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法。本法分离蛋白质的原理是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了不同蛋白质分子的电荷差异，使蛋白质按分子大小进行分离。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

SDS法可用于蛋白质的定性鉴别、纯度和杂质控制以及定量测定。染色的方法有考马斯亮蓝染色法和银染法。采用考马斯染色法检测的蛋白质浓度通常约为1~10μg蛋白/谱带，银染色法通常可以检测到含10-100ng的谱带。考马斯染色法通常比银染色法具有更好的线性，但其响应值和范围取决于蛋白质特性和染色时间。本实验采用考马斯亮蓝染色法。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS处理考马斯亮蓝染色银染

PART02SDS法

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法所用到的仪器装置：直流稳压电泳仪、垂直板电泳槽和制胶模具。所用到的试剂：重蒸水、1.5mol/LpH8.8Tris-盐酸缓冲液、30%丙烯酰胺溶液、10%SDS溶液、四甲基乙二胺溶液即TEMED、10%过硫酸铵溶液、0.5mol/LpH6.8Tris-盐酸缓冲液、电泳缓冲液、蛋白上