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表达人CD14的U937细胞系的初步构建的开题报告

开题报告

题目：表达人CD14的U937细胞系的初步构建

一、研究背景

CD14是一种表面分子，广泛分布于多种类型的免疫细胞表面，如单核细胞、中性粒细胞、树突细胞以及内皮细胞等。其作为一种高度保守的受体，可介导调节多种细胞功能，如炎症、免疫反应、抗菌等。研究发现，CD14的不同变异与多种疾病的发生有关，如炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病等。因此，构建表达人CD14的U937细胞系，探究CD14对免疫细胞和疾病发生的调节作用，对于深入理解CD14的生物学功能及阐明其调节机制具有重要意义。

二、研究目的

本研究旨在构建表达人CD14的U937细胞系，并初步探究其表达情况以及对细胞功能的调节作用，为深入研究CD14的生物学功能奠定基础。

三、研究内容和步骤

1.U937细胞的培养及转染

选用U937细胞进行转染实验，通过Lipo2000转染试剂将pCDNA3.1-hCD14质粒转染入U937细胞中。同时，设立对照组，未转染U937细胞。

2.WesternBlot检测hCD14表达

提取U937细胞和转染后的U937细胞的总蛋白，运用WesternBlot检测hCD14的表达情况。

3.流式细胞术检测CD14表面分子的表达

将转染后的U937细胞进行染色，运用流式细胞术检测CD14表面分子的表达情况，同时比较未转染U937细胞的CD14表达情况。

四、预期结果

通过转染实验，成功构建表达人CD14的U937细胞系。通过WesternBlot检测和流式细胞术，证实CD14在转染后的U937细胞中能够得到表达，并初步研究其对细胞功能的影响。

五、研究意义

本研究将成功构建表达人CD14的U937细胞系，为进一步深入研究CD14的生物学功能、调节机制和与疾病的关系，提供了一个基础平台。

六、参考文献

1.DarveauRP.TheCD14monocytedifferentiationantigenandlipopolysaccharide‐inducedsignalingandactivationofhumanmonocytes[J].Immunologyseries,1994,60:303-321.

2.TsaiFY,LinCW,LiaoYH,etal.AssociationofCD14promoterpolymorphismwithasthmainTaiwanese[J].TheJournalofallergyandclinicalimmunology,2002,109(1):83-88.

3.RaghavanM,Bj?rkholmM,TuressonI.GeneticvariationinCD14andTNF-αisassociatedwithrecurrentvenousthromboembolism[J].Thrombosisresearch,2010,125(4):345-350.