反向遗传学及其相关技术.pptVIP

TILLING特点：TILLING技术属于高频率点突变和PCR筛选相结合的技术，可发现基因的错义突变、基因截短型损伤等突变类型。可获得大量的等位基因系列，对长度很小基因，复等位基因等具有独特的技术优势。可诱导产生高频率的点突变，筛选目的基因需要较小的突变群体。不依赖于农杆菌介导转化或内源标签系统，无需耗时的转基因和复杂的组织培养。需要知道所研究基因的序列。第23页，讲稿共75页，2023年5月2日，星期三2）随机插入突变T-DNA插入突变以农杆菌介导的转化为基础的一种插入突变研究方法，根据插入位点的基因序列与植物表型变异等的相互关系可以从基因组中分离出相应的基因并鉴定其功能。构建T-DNA载体→转化→突变体的筛选及遗传分析→分离T-DNA插入位点的侧翼序列→基因的定位、结构与功能分析。第24页，讲稿共75页，2023年5月2日，星期三T-DNA法敲除植物基因及突变体筛选：a.引物设计。LP和RP分别代表插入基因两端的引物，LB是指载体上的一段引物。旁邻序列是经测序后获得的DNA序列。b.PCR产物电泳结果。分别代表野生型、杂合子和纯合子PCR条带。第25页，讲稿共75页，2023年5月2日，星期三T-DNA插入特点：不能控制其在生物体基因组中的插入位点。在植物中用T-DNA插入来敲除一个特定基因仍需要运气