吸烟致胰岛素抵抗的分子机制研究.docxVIP

吸 烟 致 胰 岛 素 抵 抗 的 分 子 机 制 研 究

产物片段分别为313bp、310bp,利用淉胶成像分析系统进行紫外光成像和图象分析，测出各条带区的光密度值。结果以InsR区带的光密度值积分/-actin区带的光密度值积分比值表示。

2.5免疫组化实验方法

251切片制备：将免疫组化用的载玻片浸泡千浓硫酸24小时后，用自来水漂涤，再将其置千37°C的烤箱中烤干，之后再将其浸千多聚赖员酸溶液中1分钟，然后再将其置千3TC的烤箱中烘干制成防脱的载玻片备用．

252光镜标本制作：冰冻骨淄肌组织在低温冰冻切生机上连续切片8张，切片厚

度约为5μm,风扇吹干，约10分钟后置千丙酮溶液中浸泡15分钟，自然隙干，熟熘水冲洗3次隙干，－20°C冰存或直接进行免疫组化试验。

.!.5.3免疫组化实验，具体步骤如下：

30％过氧化氢1份＋50份纯甲醇中浸泡15-.!0分钟热熘水u漂洗3次

抗原

抗原修复液滴加在切片上室溫5-10分钟

uu

u

PBS洗涤3次

u滴加正常山羊血消封闭液室温20分钟

u

甩去多余液体，不洗

』

滴加一抗，兔抗小鼠InsR(l: 100), 4·c过夜

』

uPBS洗涤1分钟x4次

u

生物素化－抗（抗兔IgG)