(22)--放射性核素标记化合物.pptVIP

*⑴反应液：Na125I37MBq（10μL）缓冲液（pH7.0）30μL蛋白质5μg（10μL）乳过氧化物酶25ng（10μL）葡萄糖氧化酶10ng（10μL）室温4~20min葡萄糖(0.5%)5μL(2)0.1%叠氮钠100μL中止反应(3)用Sephadex柱层析分离纯化*4.固相氧化法固相酶法:将乳过氧化物酶等交联在琼脂糖凝胶上氯甘脲法:(Iodogen)NNNNOOClClClCl固相氧化剂（温和）1,3,4,6-四氯3a,6a-双苯基甘脲4、*⑴1mg氯甘脲溶于25mL二氯甲烷，取50μL加入3mL试管中，用N2气吹干，在试管底部形成氯甘脲薄膜-20℃条件下可保存半年（Iodogen管）(2)试管中加入：Na125I37MBq（10μL）缓冲液（pH7.4）30μL蛋白质5μg（10μL）室温3min(3)取出反应液，上柱分离纯化125I-蛋白质特点：标记率高，标记蛋白损伤少杂质少，多为单碘化合物*二、*联接标记法(Bolton－Hunter法)CH2CH2C－O－NHOOOO125I125ICH2CH2C－O－NOHOOO+NH2－CHC－OCH2CH2C－HOO125I125INH－CHC－O3－(对羟基苯)丙酸－N－琥珀亚胺酯125I－标记蛋白质蛋白质分子末端氨基Na125ICh－T(联接试剂)*室温1~3min具体操作方法：⑴碘化：琥珀亚胺酯0.4μgNa125I74MBq氯胺－T50μg（10μL）Na2S2O5120μg（10μL)NaI2mg苯250μg(2)联接:分离上述苯液，移入试管，用N2气吹干后加入:蛋白质10μgPB(pH8)50μL室温10~30min甘氨酸(0.2mol)500μL0℃,5min(3)上柱分离纯化125I-标记蛋白质*优点二部操作，避免蛋白质变性缺点蛋白质接上琥珀亚胺酯，分子较大，影响活性标记率低*第四节放射性标记化合物的纯化和鉴定*没有被标记上的游离放射性核素，如碘标残存的125I；待标记物中杂质亦被标记，如蛋白标记中的杂蛋白；标记后形成的杂质，如在储存期内，或者由于标记物本身的不稳定，或者由于辐射自分解，产品的性质、结构等可能发生变化而形成的放射性杂质，所以标记结束一段时间后再用的化合物需要进行重新的纯化鉴定。一、放射性杂质的来源*二、同位素标记与非同位素标记同位素标记：指化合物中的某一稳定核素被其放射性同位素置换的方法。如用3H取代化合物分子中的1H。非同位素标记：采用并非原化合物所含元素的放射性核素进行标记的方法。如蛋白质用131I或125I标记，所得标记物与原来化合物不完全相同。**三、定位标记与非定位标记定位标记：指标记原子标记在化合物的指定位置上，以符号“S”表示。例如1(S)-14C-醋酸、2(S)-14C-醋酸，前者表示14C标记在醋酸羧基碳上，即CH3-14COOH，后者则标记在甲基碳上，即14CH3-COOH，两者所能示踪的基团不同，制备二者的合成路线也完全不同。*三、定位标记与非定位标记非定位标记：分为均匀标记和全标记。均匀标记：指放射性原子均匀地分布于分子中，以“U”表示。如用14CO2通过植物光合作用制得的14C-葡萄糖其中分子六个碳原子从统计学上看被均匀标记上14C，故可写成14C-葡萄糖(U)或u-14C-葡萄糖。全标记：是指放射性核素的原子随机地无严格定位地分布于被标记化合物分子结构上，以“G”表示。如G-3H-胆固醇，标记分子中的所有氢原子都可被取代，但机率各不相同。**四、双标记与多标记*第二节

放射性核素标记化合物的制备