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RNA干扰抑制大鼠肝星状细胞CTGF表达的实验研究的开题报告

一、研究背景和意义

纤维化是多种慢性肝病晚期的共同表现，严重影响了患者的生命质量和预后，研究纤维化的治疗方法成为热点话题。胶原三肽、转化生长因子β1（TGF-β1）等多种分子参与肝纤维化的过程，其中成纤维细胞是主要产生和分泌胶原三肽、TGF-β1等的细胞。而星状细胞也是参与肝纤维化的关键细胞之一，是表达胶原三肽、TGF-β1的重要来源。CTGF是一种入胶型细胞因子，是TGF-β1的重要下游调控分子，可直接或间接地刺激成纤维细胞和星状细胞产生胶原三肽等纤维化物质，与肝纤维化的发生和发展密切相关。

RNA干扰是一种基因敲除或抑制的方法，已经被广泛用于肝纤维化的研究。在先前的研究中，我们发现，在大鼠肝纤维化模型中，CTGF的表达显著增加，而且伴随着TGF-β1等纤维化因子的增加。因此，本实验旨在采用RNA干扰的技术，抑制大鼠肝星状细胞中CTGF的表达，观察其对TGF-β1和胶原三肽等纤维化因子表达的影响，探讨CTGF在肝纤维化发生和发展中的作用，为肝纤维化的治疗提供理论依据。

二、研究内容和方法

本实验拟采用成年雄性SD大鼠，分为实验组和对照组，每组10只。实验组采用RNA干扰技术，采用CTGF-siRNA干扰序列，构建CTGF-siRNA表达载体，转染入原代大鼠肝星状细胞中，抑制CTGF的表达；对照组采用空载体和未转染的星状细胞。将转染24小时后的实验组和对照组细胞进行总RNA提取，检测CTGFmRNA、TGF-β1mRNA、胶原三肽ImRNA和胶原三肽IIImRNA的表达水平。同时，实验组和对照组细胞培养7天，采用免疫荧光技术检测胶原三肽I和III的表达情况。

三、预期成果

预期本实验能够成功构建CTGF-siRNA表达载体，使得成功转染入大鼠肝星状细胞，抑制CTGF的表达。同时，预期能够发现CTGF的RNA干扰抑制能够显著降低大鼠肝星状细胞中TGF-β1和胶原三肽I和III的表达水平，明确CTGF在肝纤维化发生和发展中的作用。这将为肝纤维化的治疗提供理论依据，显著促进肝纤维化的治疗研究。