药敏试验方法简介.pptVIP

***CLSI对K-B法的标准化规定纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、质控方法等；常规测试、报告的抗生素。不同的药判定标准不同；不同的菌判定标准也不同。第22页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三扩散法药敏影响因素培养基pH值7.2-7.4营养程度（肠球菌能生长）厚度抗生素拮抗剂含量（用29212监控）钙镁离子含量、锌离子含量（用27853氨基糖苷类和亚胺配能结果监控）菌悬液浓度高抑菌环缩小（假耐药）浓度低则扩大（假敏感）细菌纯度气体环境普通细菌放CO2时由于碳酸的影响，药物活性受到影响，形成假敏感或假耐药苛养菌放普通环境生长不良，导致假敏感培养时间粘液性铜绿需48小时测量方法第23页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三*稀释法以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），培养16～24h后，通过观察细菌生长现象来测得药物对受试菌的最低抑菌浓度（MIC）。第24页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三稀释法（MIC法）MIC法：分为常量法和微量法常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法微量法：微量肉汤稀释法简化双浓度折点法ATB药敏简化常规浓度分布MIC法BD、德灵药敏动力学计算MIC法VITEK32、VITEK2药敏第25页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三肉汤稀释法不生长=抗生素抑制细菌生长生长=抗生素无法抑制细菌生长MIC(最小抑菌浓度)=抗生素可抑制细菌生长的最小浓度。.250.512481632MIC=8IncreasingAntibioticConc.第26页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三常量稀释法药敏试验的参考方法：将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤管中.过夜培养.MIC即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为104CFU/ml).解释标准(SorR)是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上104cfu/ml4210.50.250.120mg/ml第27页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三微量肉汤稀释法第28页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三第29页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三第30页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三接种后应充分混匀，但不能有气泡产生静置培养培养温度；35℃气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2培养时间：18小时第31页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三*药敏结果报告可用MIC（μg/ml）或对照CLSI标准用S、R和I报告。对于稀释法的批量试验，有时需要报告MIC50、MIC90。第32页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三稀释法药敏影响因素培养基pH值7.2-7.4营养程度抗生素拮抗剂含量钙镁离子含量（钙10-25；镁10-12.5μg/ml）菌悬液（5×104CFU/ml）接种效应浓度高MIC抬高浓度低MIC压低细菌纯度气体环境所有需氧细菌均放普通大气环境。如果放CO2，由于碳酸的影响，药物活性受到影响，形成假敏感或假耐药培养时间真菌需48小时奴卡菌需5天第33页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三*E-test法将稀释法和扩散法的原理结合起来，直接测定药物对受试菌的MIC。第34页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三MIC值标注于试条的光面Etest试条毛面贴于MHA上第35页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三Etest操作程序按照扩散法标准操作涂布接种贴上试条并培养15-18小时读取抑菌浓度并按标准解释第36页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三*细菌生长区E试条细菌生长抑制区25612880.16判读MIC第37页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三

肺炎链球菌

青霉素MIC=3?g/ml结果读取第38页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三第39页，讲稿共70页，2023年5月2日，星期三BDPhoenixTM-100凤凰全自动细菌鉴定/药敏检测系统最大的标本容量：对100个标本同时进行鉴定与