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实时荧光定量PCR
数据分析及常见问题分析
2021/5/61
一、数据分析
p定量PCR扩增曲线的各种概念
2021/5/62
一、数据分析
p什么是基线
•基线是扩增曲线的水平部分。
2021/5/63
一、数据分析
p基线扣除
2021/5/64
一、数据分析
p什么是阈值
•阈值是一个荧光强度值，穿过阈值X轴平行的直线称为
阈值线。
2021/5/65
一、数据分析
p什么是Ct值
•Ct值是阈值线与扩增曲线的交点对应在X轴上的值。
2021/5/66
一、数据分析
p基线
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p阈值线
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一、数据分析
p阈值线
2021/5/612
2021/5/613
二、常见问题分析
1、PCR扩增抑制（以Bio-CFX96为例）
扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。
H07存在扩增抑制；解决方法：将样本稀释后进行扩增。
（抑制物的影响可通过稀释样本消除）
2021/5/614
二、常见问题分析
pPCR抑制物
l黑色素l乙醇
l多糖类l蛋白酶K
l血红蛋白
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