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手足口病常见病原体的实验室诊断方法建立和初步临床应用的开题报告

一、研究背景及意义

手足口病（hand,footandmouthdisease，HFMD）是一种常见的急性传染病，主要由肠道病毒（enteroviruses,EV）所引起，以EV-A71和CoxsackievirusA16（CA16）为主要病原体。在我国，自1998年开始，HFMD发病率逐年上升，成为重要的公共卫生问题。

当前，对于HFMD的诊断方法主要是临床表现结合实验室检测。其中，病毒核酸检测是HFMD确诊的关键诊断方法，但病毒核酸检测仅适用于临床早期期间，其后阳性率明显下降，血清学检测是HFMD诊断中必不可少的辅助手段。病毒感染过程中，机体会产生对抗病毒的特异性免疫球蛋白，即抗体。检测患者血清中病毒抗体的含量和种类，可以帮助我们判断感染时间、感染病毒类型及感染程度，且血清学检测的优点是具有较高的特异性和稳定性。但是，由于HFMD病原体种类较多，且不同亚型之间的交叉反应比较突出，传统的病毒抗体检测方法诊断效果不佳。

因此，本研究旨在建立一种针对HFMD常见病原体的高效、快速、稳定的实验室诊断方法，并初步应用于临床实践中，为临床有效诊断和治疗HFMD提供科学依据。

二、研究内容和目标

1.建立一种HFMD常见病原体的多重酶联免疫吸附试验（multiplexenzyme-linkedimmunosorbentassay，M-ELISA），对EV-A71、CA16等病毒进行快速、高效、有选择性的检测。

2.比较M-ELISA与PCR技术在HFMD病原体检测方面的准确性。

3.在临床样本中进行初步验证，以评估M-ELISA的可行性及临床应用性。

三、研究步骤和方法

1.病毒抗体制备：采用重组蛋白技术，制备EV-A71和CA16病毒衣壳蛋白VP1，生成含某一种病毒VP1抗原的过表达重组蛋白，用于制备抗体。

2.病毒抗体检测：利用上述蛋白制备相应特异性抗体，对HFMD感染患者血清进行抗体检测。

3.制作M-ELISA板：将其浓度为1μg/well的VP1蛋白均匀吸附在ELISA板上，与其他不同的VP1蛋白共同制作出M-ELISA板。

4.制定M-ELISA检测方案：将稀释好的患者血清加入预处理好的M-ELISA板中，经过特异性检验--洗涤--检测--洗涤--检测--洗涤--加入酶标记抗体--洗涤--显色及停止反应等步骤后，通过光谱仪读取信号处理及结果分析。

5.临床应用：收集HFMD患者临床样本，进行M-ELISA检测，并对结果进行数据分析与说明。

四、研究预期成果

1.建立一种快速、高效、有选择性的HFMD病原体检测方法，对临床HFMD的诊断有意义。

2.探索并比较HFMD病原体检测的多种方法，为现有方法的改进提供依据。

3.在临床应用中，初步验证该方法的可行性及应用价值。