DB63T 1692-2018八眉猪细管冻精生产技术规程.docx

ICS65.020.30

B43

备案号：60856-2018

青海省地

DB63

方标准

DB63/T1692—2018

八眉猪细管冻精生产技术规程

2018-09-25发布

2018-12-01实施

青海省质量技术监督局发布

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DB63/T1692—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由青海省农牧厅提出并归口。

本标准起草单位：青海省家畜改良中心。

本标准主要起草人：马元梅、张楠、冯宇诚、张晋青、常永梅、赵春川、王芳、郭占泽、赵青山、许发芳、莫常山、王朝风、何得仓、李景、刘于刚。

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DB63/T1692—2018

八眉猪细管冻精生产技术规程

1范围

本规程规定了种公猪的选择和调教、采精前准备、采精、精液处理、精液冷冻、细管冻精解冻和镜检、包装、标记和贮存、细管冻精质量评价等内容。

本规程适用于八眉猪细管冻精的生产。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB4143牛冷冻精液

GB/T5458液氮生物容器

NY/T2823八眉猪

3种公猪的选择和调教

3.1种公猪的选择

种公猪应符合NY/T2823要求，三代系谱清楚。

3.2种公猪的饲养管理

种公猪单圈饲养。定时定量饲喂，以精料为主，满足其营养需要，消化能需要量为28.45MJ，体重90kg以下的公猪粗蛋白需要量为14%，90kg以上为12%，每千克饲料含维生素A3531IU，维生素E11IU。供给充足清洁饮水。经常刷拭猪体，保持清洁。每天适度运动1h~2h。

3.3种公猪的调教

选择发情旺盛的母猪并固定，引诱公猪爬跨，待其爬上母猪后，将公猪阴茎导入空拳内进行采精，反复训练2次~3次。

4采精前准备

4.1器械

4.1.1仪器设备

37℃恒温箱、17℃车载恒温箱、水浴锅、移液枪、密度仪、显微镜、离心机、冰箱、低温柜、细管封装一体机、程控冷冻仪、液氮生物容器、干燥箱。

4.1.2器具

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保温集精杯、过滤膜、比色皿、锥形瓶、载玻片、盖玻片、离心管、烧杯、量筒、0.25ml细管、提筒、试管、细管剪。

4.2器械的清洗

4.2.1仪器设备的清洗和消毒

各仪器设备应定期用紫外灯照射消毒。使用结束后，应用洁净、柔软的布将残留的精液、水、污物擦拭干净。

4.2.2器具的清洗和消毒

各器具使用后浸泡在自来水中。洗涤时，先在加有洗涤剂的温热水中刷拭，然后用清水反复冲洗干

净，最后用蒸馏水冲洗。载玻片和盖玻片洗净后用柔软的布擦干备用，其他玻璃器皿将水晾干后放入干燥箱，加热至160℃恒温60min，自然冷却后待用。0.25ml细管应置于紫外灯下消毒，其他非玻璃材质的器具洗净后自然晾干，用75%酒精棉球擦拭消毒。

4.3采精场所的卫生和消毒

采精场所保持安静，地面保持清洁卫生，采精前应喷洒0.1%高锰酸钾进行消毒。

4.4稀释液配制

4.4.1常温保存稀释液配制

向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖37g、乙二胺四乙酸1.25g、二水柠檬酸钠0.6g、碳酸氢钠1.25g、氯化钾0.075g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15min，待温度降至常温，称取青霉素钠0.6g、硫酸链霉素1g加入滤液中并混匀。

4.4.2冷冻基础液配制

向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖11g、柠檬酸14.8g、三羟甲基氨基甲烷24.2g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15min，待温度降至常温，称取青霉素钠0.6g、硫酸链霉素1g加入滤液中并混匀。

4.4.3冷冻稀释液I液配制

向锥形瓶中加入800ml冷冻基础液、200ml新鲜卵黄，搅拌均匀，置于17℃备用。4.4.4冷冻稀释液II液配制

向锥形瓶中加入940ml冷冻稀释液I液、60ml甘油，搅拌均匀，置于5℃备用。4.4.5解冻液配制

向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖50g、二水柠檬酸钠3g、乙二胺四乙酸1g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15min，待温度降至常温。

5采精

5.1台猪和种公猪的准备

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选择健壮、大小适