DB63T 1698-2018实验用喜马拉雅旱獭遗传质量控制.docx

ICS65.020.30

B41

备案号：60861-2018

青海省地

DB63

方标准

DB63/T1698—2018

实验用喜马拉雅旱獭

遗传质量控制

2018-09-25发布

2018-12-01实施

青海省质量技术监督局发布

I

DB63/T1698—2018

前言

本规程按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。

本规程由青海省科学技术厅提出并归口。

本规程起草单位：青海喜马拉雅动物实验中心有限公司、青海央宗药业有限公司、青海省野生动植物保护协会。

本规程主要起草人：吴天一、范微、张评浒、徐楠、张玲、周国华、张毓。

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DB63/T1698—2018

实验用喜马拉雅旱獭遗传质量控制

1范围

本部分规定了实验用喜马拉雅旱獭的遗传分类、封闭群的繁殖方法、遗传质量监测。本部分适用于封闭群实验用喜马拉雅旱獭的遗传质量控制和管理。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB14923实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

实验用喜马拉雅旱獭ExperimentalMarmotaHimalayana

指经人工饲育适应青藏高原低氧环境，对其携带的病原微生物和寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚，用于科学研究、教学、生产和检定等其他科学研究的青藏高原特有种鼠喜马拉雅旱獭。

3.2

封闭群或远交群Closedcolonyoroutbredstock

以非近亲方式进行繁殖的实验用喜马拉雅旱獭群体，在不从外部引入新的个体的条件下，至少繁殖4代以上，封闭群亦称远交群。

4封闭群实验用喜马拉雅旱獭的繁殖方法

按照GB14923附录A封闭群动物繁殖方法进行。

5封闭群实验用喜马拉雅旱獭的遗传质量监测

5.1遗传质量要求

5.1.1具有明确的遗传背景资料，来源清楚，有较完整的资料(包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等)。

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5.1.2用于保种及生产的繁殖谱系应清楚完整，繁殖方法科学合理。保持喜马拉雅旱獭的基因异质性和多态性，避免近交系数随代数增加而过快上升。遗传谱系鉴定参照喜马拉雅旱獭遗传进化分析方法进

行，见附录A。

5.1.3经遗传检测(微卫星分子标记)证明基因频率稳定，为相同种群。微卫星分子标记检测方法见附录B。

5.2遗传检测方法

5.2.1喜马拉雅旱獭遗传进化分析方法，见附录A。

5.2.2微卫星分子标记检测方法，见附录B。

5.2.3抽样

按表1要求。

表1抽样数量

生产种群旱獭数量

取样数量(只)

100只以上

≥30

100只以下

≥15

5.2.4微卫星分子标记的选择

选择实验用喜马拉雅旱獭13个具有高度多态的位点作为遗传检测的微卫星分子标记。5.2.5群体评价

5.2.5.1群体内遗传变异采用平均有效杂合度指标或群体平衡状态进行度量。所用分子标记或生化标记能反映群体基因多态性。

5.2.5.2当平均有效杂合度在0.5时~0.7时，群体为合格封闭群实验旱獭群体。或用群体是否达到平衡状态来判断定，如果没有达到平衡状态，说明群体的基因频率或基因型频率发生变化，该封闭群判为不合格。

5.2.5.3喜马拉雅旱獭Cytb序列进行同源比对与遗传进化分析。

5.3检测频率

封闭群实验喜马拉雅旱獭每年进行一次遗传质量检测。

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AA

附录A

(规范性附录)

喜马拉雅旱獭遗传进化分析方法

A.1实验材料与仪器

A.1.1主要试剂

DNAMarker、RNase、高保真Taq酶、琼脂糖、琼脂粉、Tris碱、质粒抽提试剂盒、AMP、IPTG、β-gal、Goldview、异丙醇、CaCl2、甘油、QIAGEN动物组织与全血DNA提取试剂盒。

A.1.2实验室常用溶液的配置方法

——TE缓冲液(pH8.0)：10mMTris-HCl，1mMEDTA；

——TAE母液(50×)：242gTris碱，57.1ml冰乙酸，100ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)定容至1升；

——凝胶加样缓冲液母液(6×)：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青FF，30%甘油水溶液4℃贮存；——Goldview染液：50mlTAE缓冲液中加入