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表达绿色荧光蛋白的猪伪狂犬病病毒与猪细小病毒VP2基因的重组病毒的构建的开题报告

一、研究背景

绿色荧光蛋白（Greenfluorescentprotein，GFP）是一种广泛应用于生物荧光标记的蛋白质，可以在不需要外加染料的情况下直接观察、记录细胞、组织以及生物体内的活动过程。猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PrV）是一种具有广泛宿主范围的DNA病毒，对猪、狗等动物造成严重感染。猪细小病毒（Porcineparvovirus，PPV）是一种DNA病毒，可以导致母猪体内的胚胎死亡和胎儿畸形，造成猪群的经济损失。因此，通过利用猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒为载体，构建表达GFP的重组病毒，可为快速、可靠、简便的检测猪伪狂犬病和猪细小病毒提供新的思路和方法。

二、研究内容

本研究将采用基因重组技术，将GFP基因插入猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒VP2基因上方，构建表达GFP的重组病毒。主要包括以下几个方面的内容：

1.利用引物扩增GFP基因和VP2基因，构建GFP和VP2基因耦合的PCR产物；

2.将PCR产物克隆到质粒载体上，构建GFP/VP2重组质粒；

3.利用猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒的特异性启动子及基因组长度等特异性序列，将GFP/VP2重组质粒转染入细胞，筛选获得表达GFP的重组病毒；

4.通过Westernblot、荧光显微镜等技术，验证所构建重组病毒的表达和稳定性。

三、研究意义

本研究以猪伪狂犬病病毒和猪细小病毒为载体，实现了表达GFP蛋白的重组病毒的构建，为研究、检测猪伪狂犬病和猪细小病毒提供了新的方法和手段。同时，该研究还为后续研究构建其他表达载体奠定了技术基础。