单基因遗传病的遗传方式.pptVIP

AGTCAGTCAGTCAGTCAGTCAGTCDNA测序仪的发展平板凝胶电泳毛细管电泳SimpleGelLoadingLongReadIRDNASequencerGeneReadIRDNAAnalysisSystemBIOTECHNOLOGYDIVISIONAB公司DNA分析仪大家族平板凝胶电泳式：377-36,377-96毛细管电泳式：310,3100和3700，3730XLABIPRISM377DNASequencerABIPRISM377测序仪ABIPRISM310遗传分析仪ABIPRISM3100遗传分析仪ABIPRISM3700遗传分析仪ABIPRISM3730遗传分析仪（五）生物信息学技术（DNA芯片技术）（五）生物信息学技术（DNA芯片技术）应用实践基因测序特定序列的DNA与特定长度寡核苷酸重叠区域来测定精确度达99%2.Southern杂交－检测DNASouthern杂交－检测DNA（a）（b）（c）（d）（e）基因组DNADNA限制片段硝酸纤维素滤膜同探针同源杂交的基因DNA片段X光底片Southern印迹杂交技术应用实践1、对未知突变的基因进行检测的方法限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)?根据以上杂交结果，可以得知个体1的基因型为AA，个体2的基因型为Aa，个体3为aa，个体1和2的表现型正常，但2为携带者，个体3的表现型为α地中海贫血患者。14kb10kb个体1个体2个体3Southern印迹杂交方法应用α地中海贫血患者是由于α基因缺失所致，如果用α基因为探针，在正常个体的可以检测到14kb的BamHI片段，如果缺失一个α基因，则检测到10kb的BamHI片段。如下图：DNA分析Huntington舞蹈病症状前诊断指在遗传病的临床症状出现前所作的诊断。有些常染色体显性遗传病的杂合子个体发病时往往已经生儿育女，如能在可疑杂合子个体生育之前就作出诊断，就能避免影响子代。1、家系调查和系谱分析2、DNA分析2、对已知突变的基因进行检测的方法

等位基因特异的寡核苷酸探针（allelespecificoligonucleotides，ASO）该方法是根据正常序列和突变序列各设计一个骑跨突变位点的寡核苷酸探针，一般为15-30个碱基，两探针的区别仅在于突变碱基的不同，用以检测正常等位基因的探针称为正常等位基因特异探针，用以检测突变等位基因的探针称为突变等位基因特异探针。只能用来检测已知突变。??根据以上杂交结果，可以判断出各个体的基因型：个体1和2的基因型为Aa，表现型为患者；个体3和6的基因型aa，表现型为正常；个体4和5的基因型为AA，表现型为患者。个体1个体2个体3个体4个体5个体6正常等位基因探针突变等位基因探针一对夫妻已生育一个苯丙酮尿症患儿及一个正常孩子，现又已怀孕，要求作产前诊断，家系成员及胎儿羊水细胞DNA用内切酶EcoRI和BamHI消化，结果如下：

（二）PCR技术PCR原理1）对靶DNA序列进行选择性扩增，需要合成两个寡核苷酸引物（primer）。引物可特异地在靶DNA两侧区互补结合，决定PCR扩增的特异性，即扩增片段的长度；2）必需具有DNA前身物，即4种三磷酸脱氧核苷：dATP，dCTP，dGTP和dTTP，以按5’→3’方向合成新DNA链；3）PCR是链式反应，以新链为模板，在含有一定离子（如Mg2+）浓度的反应缓冲液体系中，在有耐热的DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下进行反复周期地DNA扩增；4）每一周期经过变性（人基因组DNA大约93-95℃），复性（大约50-70℃）和延伸（大约70-75℃）三个阶段产生倍增DNA。反复n个周期，理论上可扩增2n倍，一般大约在30-40周期的扩增后，可获百万倍以上的靶DNA。DNA扩增PCR反应温度（℃）时间（min）94726094℃变性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循环1循环2循环3PCR反应的温度循环周期PCR反应的每一个温度循环周期都是由DNA变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。