特异结合APP上a分泌酶酶切位点单链抗体的筛选及其特性研究的开题报告.docxVIP

特异结合APP上a分泌酶酶切位点单链抗体的筛选及其特性研究的开题报告

题目：特异结合APP上a分泌酶酶切位点单链抗体的筛选及其特性研究

一、研究背景及意义

阿尔茨海默病（Alzheimersdisease,AD）是一种常见的神经系统退行性疾病，其病因至今仍不清楚。研究表明，AD的主要特征是β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）在大脑中的沉积，进一步引发神经元损伤和炎症反应。Aβ由APP（Amyloidprecursorprotein）前体蛋白通过酶切而产生，而Aβ蛋白的表达和沉积是AD病理过程中的关键环节。因此，探索寻找针对Aβ蛋白的抗体，对AD的治疗及防治有极其重要的意义。

单链抗体（Single-chainantibody,scFv）是一种由重链及轻链基因片段连接而成的抗体分子，其具有高亲和力、高特异性和易于改造等优点，因而在抗体药物研发及应用中具有重要价值。本研究旨在通过生物学技术筛选出特异结合APP上a分泌酶酶切位点的单链抗体，研究其体外抗Aβ活性及稳定性等特性，为开发阿尔茨海默病治疗药物提供一定的理论和实验基础。

二、研究内容及方法

1、构建目标基因片段：合成DNA序列模拟人源的APP前体蛋白，在其N端和C端分别加入His-tag和myc-tag序列。将其连接到pET-28a载体中，制备重组质粒。

2、表达目标蛋白：将重组质粒在大肠杆菌中表达目标蛋白，利用亲和层析技术纯化目标蛋白。

3、制备免疫库：以目标蛋白为抗原，制备小鼠或兔子并获取其血清，从血清中分离出抗体，制备免疫库。

4、抗体筛选：利用生物学技术筛选免疫库中结合APP上a分泌酶酶切位点的单链抗体，并对其进行初步的体外抗Aβ活性检测。

5、抗体特性研究：对筛选出的单链抗体进行亲和力、特异性的测定，对其稳定性进行体外实验。

三、预期结果

本研究通过生物学技术筛选出特异结合APP上a分泌酶酶切位点的单链抗体，并对其体外抗Aβ活性、亲和力、特异性及稳定性等进行研究。预计可以获得特异性良好、亲和力较高的单链抗体，为阿尔茨海默病的治疗及防治提供理论和实验基础。