免疫学试验技术.pptVIP

关于免疫学试验技术第1页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三概论第2页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三免疫学技术利用免疫学反应的特异性原理建立的各种检测与分析技术以及建立这些技术的各种制备方法。包括：免疫血清学技术用于抗原或抗体检测的体外免疫反应技术；细胞免疫技术用于研究机体细胞免疫功能与状态的技术；免疫制备技术指制备与免疫检测有关制剂的各种技术。第3页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三

一、细胞免疫技术

淋巴细胞计数与分类淋巴细胞功能测定细胞因子测定E玫瑰花环试验T细胞亚群检测试验淋巴细胞转化试验细胞毒性T细胞试验巨噬细胞移动抑制试验白介素测定干扰素测定用途免疫机理诊断治疗药物选择类型++-++--+++-+++-+++-++-+++-++体内细胞免疫试验皮肤试验++-+试验名称第4页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三（一）淋巴细胞计数与分类

1.淋巴细胞数量检测技术1.1T细胞E玫瑰花环试验检测T细胞T淋巴细胞表面CD2分子是绵羊红细胞（SRBC）受体，也称E受体，在一定条件下，SRBC环绕T细胞与之结合，形成花环状，称E花环（E-rosette），形成此种花环的细胞称E花环形成细胞。1.2EA玫瑰花环试验检测B细胞B淋巴细胞有表面Fc受体，以鸡红细胞作为指示细胞与相应的抗红细胞抗体形成EA，B淋巴细胞可以通过Fc受体与EA形成花环，以此计算B淋巴细胞的数目。1.3EAC玫瑰花环试验检测B细胞B淋巴细胞表面具有补体C3受体，红细胞可与相应的抗体结合形成抗原抗体复合物（EA），进而与补体结合(EAC)，然后与B淋巴细胞表面的补体C3受体结合而形成花环，以供计数B淋巴细胞。第5页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三第6页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三第7页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三1.4酯酶染色法ANAE+检测T细胞T淋巴细胞的胞浆内存在着酸性a–醋酸萘酯酶(ANAE+)，在酸性条件下，能使底物醋酸萘酯水解产生a–萘酚，而a–萘酚与六偶氮副品红作用形成不溶性的红色沉淀物而沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的部位。第8页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三2.T细胞亚群检测技术T细胞总数：CD3；TH:CD4；Tc:CD8应用针对CD抗原的单抗来鉴别各T细胞亚群。2.1间接免疫荧光法分离淋巴细胞CD单抗荧光二抗镜检计数2.2流式细胞术分离淋巴细胞CD单抗荧光二抗FACS测试管计数第9页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三（二）淋巴细胞功能测定淋巴细胞转化试验淋巴细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原（如PHA、ConA）或特异性抗原刺激后，可出现代谢旺盛、蛋白质和核酸合成增加、细胞体积增大并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为淋巴细胞转化现象。淋巴细胞转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平，因此，可作为测定机体免疫功能的指标之一。淋巴胞转化试验的方法有形态学方法、MTT法、3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法。第10页，讲稿共22页，2023年5月2日，星期三A、形态学方法1、原理淋巴细胞在体外培养过程中受有丝分裂原如植物血凝素（PHA）等刺激后，可转化为体积较大的母细胞，胞浆增多而深染，核增大并可见核仁部分细胞可出