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变性梯度凝胶电泳系统介绍

变性梯度凝胶电泳法(denaturinggradinentelectrophoresis,DGGE)分析PCR产物，如果突变发生在最先解链的DNA区域，检出率可达100%,检测片段可达1kb,最适围为100bp-500bp。基本原理基于当双链DNA在变性梯度凝胶中进行到与DNA变性温度一致的凝胶位置时，DNA发生部分解链，电泳迁移率下降，当解链的DNA链中有一个碱基改变时，会在不同的时间发生解链，因影响电泳速度变化的程度而被分离。由于本法是利用温度和梯度凝胶迁移率来检测，需要一套专用的电泳装置，合成的PCR引物最好在5、末端加一段40bp-50bp的GC夹，以利于检测发生于高熔点区的突变。这个方法是应用最早也是最常用的突变筛查方法之一，在过去的十年中经历了很大的改进。

L原理

如果DNA双链分子全长不断增加温度或用化学变性剂处理，两条链就会开始分开(解链)。首先解链的区域由解链温度较低的碱基组成。GC碱基对比AT碱基对结合得要牢固，因此G.C含量高的区域具有较高的解链温度。同时影响解链温度的因素还有相邻碱基间的吸引力(称作“堆积”)。解链温度低的区域，通常位于端部称作低温解链区(lowermeltingdomain)。如果端部分开，那么双螺旋就由未解链部分束在一起，这一区域便称作高温解链(highmeltingd