GB_T 43160-2023 正式版 梨火疫病菌检疫鉴定方法.pdfVIP

ICS65.020.20

CCSB16GB

梨火疫病菌检疫鉴定方法

2023-09-07发布

国家市场监督管理总局

发布

国家标准化管理委员会

前言

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承扭识别专利的责任，

本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。

本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、塔里木大学、三亚中国检科院生物安全中心、上海海

关、广州海关技术中心、乌鲁木齐海关技术中心、天津市滨海新区农业服务中心、昌吉市农业技术推广中

心、伊宁海关技术中心、南京农业大学。

本文件主要起章人；赵文军、田茜、张王娥、马云龙、易建平、魏霜、王种、张小菊、李乐书、王朝阳、

孟茹、陆平、胡白石。

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梨火疫病菌检疫鉴定方法

1范围

本文件描述了梨火疫病菌的分离培养、免疫学及分子生物学等检测方法。

本文件适用于粟、苹果等蔷薇科植物植株、砧木、接糖及幼果传带的梨火疫病菌的检疫鉴定以及病

害的田间词查与监测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4火疫病菌基本信息

传播途径：染病的植物繁殖材料(包括种苗、砧木和接稳)、昆虫、风、雨以及被污染的包装材料和运

输工具等多种自然因素及人为因素均可引起梨火疫病的传播。其中，染病的植物繁殖材料是梨火疫病

远距离传播的主要途径。

梨火疫病菌的其他信息参见附录A。

5方法原理

根据梨火疫病菌与抗体之间的特异性反应进行免疫学检测；根据梨火疫病蓝的特异性DNA序列

进行分子生物学检测；根据梨火疫病菌的培养性状、生物学特性、寄主范图及危害症状等对病原菌进行

分离培养鉴定及致病性测定。

6仪器设备和主要试剂

6.1仪罪设备及用具

超净工作台、恒温培养箱、摇床、超低温冰箱、常规冰箱、高压灭菌锅、恒温水浴锅、小型离心机、高速

鉴定仪(Biolog)、制冰机、电子天平、涡旋报荡器、微量进样器等。

6.2主要试剂

2×PCR反应预混液、2×荧光PCR反应预混液等，缓冲液及培养基按附录B配制，除另有规定

外，所有试剂均为分析纯。

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GB/T43160—2023

7检疮鉴定方法

7.1症状检查

检查植株有无梨火疫病的典型症状见附录A.中的症状描述，早春为重点监测时期。主要检查嫩

梢、花、果和枝干等部位，观察缴梢是否出现费蒿(牧羊鞭状)、变黑枯死；花和幼果是否变黑枯死；叶脉是

否从叶柄基部向上变黑；枝干是否有溃疡班以及病组织上是否有菌脓。对出现典型症状或疑似症状的

植株进行拍照记录，并采集表现症状的缴梢、花熊、枝干、幼果等送实验室检测鉴定。对于未表现典型症

状的幼嫩枝条，应重点对其顶端和基部取样。

7.2样品的制备

7.2.1显症植株样品的制备

样品采集后应尽快检测，若不能及时检测，样本应在4℃～8℃下保存，尽可能不粗过一周。采集

样品以及在运输和处理过程中应注意避免交叉污染。

样品处理应采用分离培养、免疫学和分子生物学检测都有效的通用程序。样品用无菌蒸馏水或

pH7.2的碘酸盐缓冲液(PBS)处理，直接用于分离培养、免疫学或分子生物学检测。

尽量选择表现出最典型症状并带有菌脓的植物部位(花朵、嫩梢、幼枝、叶片或果实)。挑取病健交

研磨或挤压，静置至少5min,制成样品悬浮液，用于后续分高培养、免疫学检测及分子生物学检测。

7.2.2无症植株样品的制备

无症状样品宜单个处理，或者最多10个一组。样品处理和提取过程中小心避免交叉污染。

开花期开始至果实膨大中期，采集花器、幼果幼梢枝段，装人无菌袋或容器中。从符检植株上剪下

长度约为20cm的嫩梢或花期时的花器。如果在冬天进行采