冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作.docxVIP

冷冻切片技术实验及冷冻切片机的基本操作

实验目的

掌握冷冻切片的方法

掌握冷冻切片的用途

实验原理

冷冻切片是借助低温使组织冻结达到一定的硬度并通过冰起支撑作用来进行切片的一种方法。

速冻可减小冰晶直径，避免组织细胞损伤。制冷压缩机佛里昂制冷、半导体温差电制冷

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实验材料

新鲜动物肝脏

实验方法

准备 将仪器打开，样品台温度调至-40℃。

取材 组织必须新鲜，尽可能不经水洗。取材时应避免组织挤压，防止人为假象。样品大小5X5X3mm。

速冻 将样品放在样品台上，样品四周加水加固，冷冻5－10min.

切片 升高温度至-15℃（视样品而定），约5min后开始切片，厚度6-15um。

制片 将切片直接放在载波片上或先放在盛水（固定液）的培养皿中再转移到载波片上。

染色观察 吸干水，加一滴苏木精，加盖玻片，用显微镜观察。

记录 将观察的结果绘于实验报告上，整理自己用过的物品。

附：切片温度的设定脑 -12℃

肝脏 -14℃

肾脏 -16℃

肌肉 -20℃皮肤 -25℃

多脂肪组织 -30℃

经过固定的组织 -5℃～-10℃

附：快速永久制片

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