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西尼罗河病毒结构蛋白prM+E在大肠杆菌及昆虫细胞中的表达的开题报告
研究背景:
西尼罗河病毒(WestNileVirus,WNV)属于黄病毒科,是由蚊子传播的病毒,其主要主要致病性为西尼罗热,常见于非洲、欧亚大陆和北美洲。WNV的结构蛋白主要由膜前蛋白(prM)、膜蛋白(M)和包膜蛋白(E)组成,其中prM+E被广泛研究作为WNV疫苗的目标抗原,其表达与纯化难度较大,因此需要开展更多的研究。大肠杆菌和昆虫细胞是两种常见的重组蛋白表达系统,且具有经济、快速和高效的特点,因此可以用于对prM+E进行表达,为WNV的研究提供支持。
研究目的:
本文旨在采用大肠杆菌和昆虫细胞表达系统对prM+E进行表达,并比较两种表达系统的效率和适用性,为WNV的研究提供参考。
研究方法:
1.获取prM+E基因序列,选择适当的载体,构建重组克隆。
2.将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)和Bac-to-Bac昆虫细胞中,诱导表达。
3.采用SDS和Westernblotting检测prM+E的表达、纯化情况及其免疫原性。
4.采用ELISA检测表达的prM+E的抗原性,并比较两种表达系统的效率和适用性。
预期结果:
1.成功构建含prM+E基因的重组克隆。
2.成功表达和纯化WNV的prM+E蛋白。
3.成功检测到prM+E蛋白的免疫原性及其抗原性,比较两种表达系统的效率和适用性。
4.该研究可为后续研究WNV的疫苗设计和开展抗原性研究提供基础数据。
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