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GLS/IL-12重组BCG的构建及其抗肿瘤作用的初步研究的开题报告

一、研究背景

结核分枝杆菌素（BCG）是一种严格的人工摄取和培养的活菌苗，作为世界上最早的、广泛应用的疫苗之一。BCG疫苗的保存和使用都及其方便易行，同时，其治疗特异性感染性结核病的有效性已被广泛证实。此外，BCG疫苗还被广泛用于治疗多种肿瘤，尤其是膀胱癌和黑色素瘤。癌症主要是由于免疫反应麻痹或失控导致的；为了有效预防和治疗肿瘤，BCG疫苗接种已成为研究的热点。

IL-12是一种强效的生物活性分子，已广泛应用于体外和体内治疗肿瘤的研究中。IL-12直接促进和增强机体的自然杀伤细胞和T细胞的细胞毒性，以及增强细胞介导的免疫应答（包括细胞介导的免疫反应和体液介导的免疫反应），具有重要的抗肿瘤作用。与此同时，IL-12还可以减少肿瘤的血管生成，促进肿瘤细胞凋亡，阻止恶性肿瘤的发生和发展。

二、研究目的

在此研究中，我们的目标是根据前述研究的发现，利用基因工程技术制造GLS/IL-12重组BCG疫苗，以评估其对肿瘤生长的潜在抑制作用。我们将探究这种疫苗对小鼠和人体肿瘤细胞的免疫应答、毒性测试和体内抗肿瘤效力。

三、研究方法

1.取得BCG疫苗，并建立鉴定和储存程序。

2.从小鼠或人体肿瘤细胞中分离出肿瘤细胞。

3.提取IL-12和GLS基因的DNA，并通过PCR技术放大DNA片段。

4.将扩增的IL-12和GLSDNA片段进行过滤、杂交和接头处理，然后通过转化DNA技术将它们从原来的托带细胞中转移到BCG细胞上。

5.将重组BCG疫苗通过多种实验技术进行鉴定：如菌液存活度和含量测定、多肽芯片分析、真核和原核蛋白质表达系统合成和分析等。

6.将重组BCG疫苗注射到健康小鼠的体内，然后监测小鼠的免疫应答、体内毒性反应和体重变化情况等。

7.利用小鼠模型和人的肿瘤细胞模型评估重组BCG疫苗的抗肿瘤功效，如：病毒水平抑制、肿瘤大小、肿瘤细胞增殖、并能评估免疫细胞和因子调节器在此过程中的作用。

四、研究意义

重组BCG疫苗是基于很多前人的工作得出的一种新策略，它不仅具有保护和治疗结核病的良好效果，更是一种极具希望的肿瘤预防和治疗疫苗，对于成功预防和治疗恶性肿瘤具有重要的临床意义。此项研究的成果有助于进一步探索BCG疫苗作为抗肿瘤治疗药物的可能性，提高重组BCG疫苗的性能，拓展其应用领域，以期更好地服务于广大患者。