基因工程菌发酵.pptVIP

4、控制基因过量表达提高质粒稳定性的目的是为了提高克隆菌的发酵生产率，但外源基因表达水平越高，重组质粒往往越不稳定。可采用两阶段培养法，即在发酵前期控制外源基因不过量表达，使重组质粒稳定地遗传；到后期通过提高质粒的拷贝数或转录、翻译效率使外源基因高效表达。1〕可诱导性启动子?在构建表达载体时，可使用可诱导性的启动子，如：lac、trp、PL等?在用含有这些启动子的克隆菌进行发酵生产时，可以选择培养条件使启动子受阻遏〔抑制〕到一定时期；然后去阻遏〔诱导〕使质粒高效表达。例如：利用3-?-吲哚乙酸可使trp启动子去阻遏2〕温度敏感型质粒一些温度敏感型质粒在温度较低时质粒拷贝数较少，当温度升高到一定值时质粒大量扩增——脱缰质粒〔runawayplasmid〕?如：pKN410在30℃时的拷贝数为20～50/E.coli细胞；在35℃时质粒大量复制。?将?-内酰氨酶基因接在其上，经热诱导后，酶活可扩增400倍。5、控制培养条件?对于一个已经组建完成的工程菌来说，选择最适的培养条件是进行工业化生产的关键步骤。?在众多的环境因素中，培养基的组成、培养温度、菌体的比生长速率3个方面尤其重要。?环境因素对质粒稳定性的影响机制错综复杂，许多尚属未知。3、基因工程菌的高密