培养基无菌性试验.docxVIP

附件7.4

测试内容：培养基无菌性试验

目的和检查描述：

本试验的目的是证明除菌过滤系统能够有效的过滤除去微生物，培养基模拟分装试验的结果受培养基无菌性的影响很大，若不能保证培养基在模拟分装试验前的无菌性，或培养基在分装前受到微生物污染，则不能保证试验结果的可信性，也很难成功地完成此项模拟试验。因此在粉针剂模拟分装试验之前进行培养基无菌性试验。在证明了培养基的无菌性之后进行模拟分装的方法，以排除培养基无菌性对此项验证试验的影响，从而确认模拟分装试验中的污染来源于分装过程。本次试验同时也是培养基无菌灌装验证之前的预试验。

操作：

培养基无菌性试验的主要方法是将一次除菌过滤后用于模拟分装的TSB培养基用灌装机分装于一定数量（400支）的无菌预充式注射器中，加塞封口，剩余的培养基分装在已灭菌的带棉塞的三角瓶中，连同灌装好的注射器一同在相应温度下培养7天，7天内各预充式注射器TSB培养基中应无任何微生物生长。本次验证所用预充式注射器为威高产3.0ml注射器（带胶塞），因该注射器与生产用（BG产）预充式注射器（带胶塞）的内径、高度、材质完全一致，为了降低验证成本，选用威高产3.0ml注射器作为本次试验用预充式注射器，培养微生物生长性能试验及今后的培养基无菌灌装工艺也用该注射器。

按照培养基说明书的要求配制16LTSB培养基，按照《重组人血管内皮抑制素除菌过滤标准操作规程》（MF057）和《SartoriusSartopore2除菌过滤系统的标准操作规程》（MF191）的要求进行一次除菌过滤，带膜完整性检测合格后，把培养基移到灌装室的百级层流下进行二次除菌，灌装400支注射器，在灌装时按照灌装的顺序用1,2,3…….400进行依次标记于橡胶护帽上，灌装结束后，剩余的TSB培养基通过二次除菌过滤后分装在已经过灭菌的三角瓶（带棉塞、纱布和牛皮纸的）中，2个3L的三角瓶各装3L，两个2L三角瓶，每个装2L，一个1L三角瓶，装1L培养基（用于培养基的微生物生长性能试验用），过滤前取200ml培养基，采用薄膜过滤法，对培养基进行微生物含量检查，检查方法参照《微生物限度测定标准操作规程》（QC117）。除菌所用的Sartopore2SterileMidiCap型过滤器在灭菌前和过滤后按照《SartoriusSartocheck4膜完整性测试仪标准操作规程》（MF190）对其进行膜完整性检查（B.P3.2bar）。

应按以下文件进行检查：

测试内容/项目

检查附件

是否可接受

备注

培养基配制及器具的灭菌

7.4.1

灌装环境的清洁、消毒效果检查及人员着装检查

7.4.2

TSB培养基无菌性试验

7.4.3

执行人：

日期：

复核人：

日期：

7.4.1培养基配制及器具的灭菌

7.4.1.1培养基配制记录：

培养基名称

生产厂家

批号

配制方法

胰酶酪豚大豆肉汤

培养基

g干粉，加注射用 L，

加热溶解

操作人： 复核人： 日期:

7.4.1.2除菌过滤前TSB培养基微生物限度检验

检查依据：

微生物检查参照《微生物限度测定标准操作规程》（QC117），采用薄膜过滤法.

营养琼脂培养基的配制：称取营养琼脂培养基干粉（中检所监制，批号：） g，加纯

化水ml加热溶解。

检验用平皿的准备：准备直径90mm的带盖玻璃平皿 套，用牛皮纸包裹。

灭菌：以上培养基和物品统一灭菌，灭菌条件：121°C,30min。

操作人： 复核人： 日期：

玫瑰红钠琼脂培养基的配制：称取玫瑰红钠琼脂培养基干粉（中检所生产，批号：）

g，加纯化水ml，加热溶解。

检验用平皿的准备：准备直径90mm的带盖玻璃平皿 套，用牛皮纸包裹。

灭菌：以上培养基和物品统一灭菌，灭菌条件：121°C,30min。

操作人： 复核人： 日期：

Rodac碟培养基的的配制：称取胰酪豚大豆肉汤培养基干粉（上海中科，批号：）

g，卵磷脂（国药集团，批号：）g，吐温80（批号：）

9，加入纯化水ml,微温使其溶解，用1.0M的氢氧化钠调节pH值使灭菌后为

7.3±0.2，加入琼脂g，加热使其溶解。

灭菌：灭菌条件：121°C,30min。

Rodac碟的批号：，生产厂商：，数量：。

操作人： 复核人： 日期：

取样用试管的准备：准备10ml试管支，内装2ml生理盐水和一根医用棉签，管口用医用纱布包

裹的脱脂棉塞塞住，再用牛皮纸封口。

灭菌：灭菌条件：121°C,30min。

操作人： 复核人： 日期：

7.4.1.3培养基除菌过滤前微生物含量检查结果:

加样量（ml）

营养琼脂平板菌落数（CFU/ml）

玫瑰红钠琼脂平板菌落数（CFU/ml）

总菌落数

（CFU/ml）

检查人： 复核人： 检查日期： 报告