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甘蔗赤腐病抗病性鉴定技术规程

1范围

本文件规定了甘蔗赤腐病抗病性鉴定的术语和定义、病害症状及流行特点、材料准备与

种植、接种体准备、接种液制备、接种方法、病情调查、抗病性评价。

本文件适用于甘蔗属及其近缘属中的种质资源、甘蔗属种间杂交种对甘蔗赤腐病抗病性

的人工接种鉴定与评价。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

甘蔗赤腐病sugarcaneredrotdisease

由镰孢炭疽菌Colletotrichumfalcatum侵染甘蔗叶片中脉、蔗茎、蔗头引起叶片中脉、

蔗茎、蔗头腐烂坏死的一种流行性真菌病害。

3.2

对照品种controlvariety

已知抗病性的标准品种，把待鉴定品种的抗病性表现与其相比较。

3.3

接种体inoculum

通过人工制备能够侵染寄主引起相应病害的病原物。

3.4

抗病性diseaseresistance

植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传形状。

4病害症状及流行特点

甘蔗赤腐病的症状及流行特点参见附录A。

5材料与种植

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5.1材料选择

选择无病的健壮甘蔗植株。

5.2对照品种

鉴定材料中应加入粤糖93159和新台糖1号作为感病对照品种，粤糖86368和柳城05136

作为抗病对照品种。

5.3材料处理

将待鉴定甘蔗植株分别切成双芽段，共80个芽，用70%噻虫嗪水分散剂和50%多菌灵

可湿性粉剂1：800液浸种5min～10min。

5.4材料种植

种植时间为2月～3月，采用完全随机区组设计，每份材料各种植4行，4次重复，

行距1m、行长5m，每行20个芽，共80个芽，常规栽培管理。

6接种体准备

6.1培养基准备

马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉20g。将马铃薯去皮、

切成小块，加1000mL去离子水煮沸30min，80目～100目双层纱布过滤。滤液中加入

葡萄糖和琼脂，用去离子水定容至1000mL，混匀加热融化。滤液分装至三角瓶并用耐高温

封口膜封口，121℃高压灭菌20min，在超净台中倒入无菌培养皿，冷却后备用。

6.2病样处理

在超净台中将带有赤腐病症状叶片于病健相间部位切下长宽5mm叶组织，用75%酒精

浸泡20s消毒，再将其浸泡于0.2%次氯酸钠中，摇动使其充分接触消毒液1min，用无菌水

冲洗3遍，放置于无菌滤纸上吸干表面水分。

6.3病原培养

将6.2处理的叶组织平放在加有50mg/mL氯霉素PDA培养基表面，将培养皿倒置，

放于29℃恒温培养箱内培养2d～3d。菌落长出后，用接种针挑取菌落边缘菌丝接种于

PDA培养基于28℃恒温培养10d～14d。经2～3次转接后菌株得以纯化可作接种体，放

4℃冰箱保存备用。

7接种液制备

取6.3培养的接种体加入灭菌双蒸水稀释混匀，用80目～100目双层纱布过滤，滤液

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即为孢子悬浮液。搅拌均匀后用血球计数板计数法加灭菌双蒸水配制成8×10～10×10个

孢子/mL的悬浮液用于接种，现配现用。

8接种方法

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8.1接种方法选择

接种方法可根据各自条件选择田间钻孔接种法或可控条件接种法。

8.2田间钻孔接种法

供试材料5月～6月株龄，选择无赤腐病甘蔗植株进行田间钻孔接种。用直径8mm

钻孔器在地面上第2或第3节间中部钻孔（直径8mm，深12mm），用移液枪将100μL接

种液滴入钻孔中，取厚湿无菌脱脂棉封孔，再用无菌保鲜膜包裹住，每份材料每重复（每行）

接种5株共20株。整个接种期间，每天喷水1次～2次保持相对湿度在75%～90%。

8.3可控条件接种法

供试材料8月～10月株龄