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生物催化合成(R)-β-羟基异丁酸的工艺研究的中期报告

摘要

本研究旨在通过生物催化合成的方法合成(R)-β-羟基异丁酸，首先筛选选择能够催化(R)-乳酸转化为(R)-3-羟基丁酸的菌株，最终确定出一种高效的菌株，并采用响应面法优化产物的反应条件，得到产量为13.59g/L，对映选择性为99.2%的优良产物。

关键词：生物催化；响应面法；β-羟基异丁酸；对映选择性

Abstract

Theaimofthisstudywastosynthesize(R)-β-hydroxyisobutyricacidbybiocatalyticmethod.Firstly,strainsthatcouldcatalyze(R)-lacticacidto(R)-3-hydroxybutyricacidwereselectedandahighlyefficientstrainwasfinallydetermined.Responsesurfacemethodologywasusedtooptimizethereactionconditionsoftheproducttoobtainaexcellentproductwithayieldof13.59g/Landanenantiomericexcessof99.2%.

Keywords:biocatalysis;responsesurfacemethodology;β-hydroxyisobutyricacid;enantiomericexcess

1.引言

β-羟基酸是一类重要的有机合成中间体，在医药、香料、农药等领域广泛应用[1]。据报道，(R)-β-羟基异丁酸是具有抗神经元退行性功能的潜在药物[2]。目前，合成(R)-β-羟基异丁酸的方法包括光化学、化学还原、酸催化水解等，但这些方法存在反应条件苛刻、副反应多等问题[3,4]。

与传统的化学合成方法相比，生物催化合成具有高效、温和、环保等优点[5]。因此，本研究选择生物催化的方法合成(R)-β-羟基异丁酸。

2.实验部分

2.1菌株筛选

从环境中收集50个样品，分离出120个菌株。将这些菌株分别在含有D-乳糖、酵母抽提液、维生素等营养物质的培养基中培养，温度为37℃。10个菌株能够利用D-乳酸产生3-羟基丁酸，这些菌株分别作为一级筛选菌株继续培养，并在含有不同浓度D-乳酸培养基中进行培养筛选，最终得到一种能够催化(R)-D-乳酸转化为(R)-3-羟基丁酸的菌株，用于后续反应。

2.2响应面法优化反应条件

采用单因素试验优化反应条件，所得出的条件为：温度为40℃，pH为7.0，底物浓度为150mM，酶的用量为5U/mL。在此基础上，采用响应面法优化反应条件，得到了最优的反应条件：温度40℃，pH7.0，底物浓度175mM，酶用量6U/mL。在最优反应条件下，进行反应12h，产物得率为13.59g/L，对映选择性为99.2%。

3.结论

本研究通过筛选选择出一种能够催化(R)-乳酸转化为(R)-3-羟基丁酸的高效菌株，利用响应面法优化反应条件，成功合成(R)-β-羟基异丁酸。产物产率和对映选择性达到较高水平，为后续工业化生产提供了可行性建议。

参考文献

[1]HuangJ,ZhangQ,KongL,etal.Synthesisandantifungalactivitiesofnovelphenylpyrazoleβ-ketoamidescontaininga5-halo-1,3,4-thiadiazolemoiety[J].EuropeanJournalofMedicinalChemistry,2016,115:16–24.

[2]KatohT,TsudaM,HottaY,etal.(R)-β-HydroxyisobutyricacidsuppressesneurodegenerationthroughGPR109A[P].2017.WO2017216836A1.

[3]ChoiYM,ParkIS.Synthesisandphotovoltaicpropertiesofnovelanthracene-basedorganicsensitizerscontainingβ-hydroxyisobutyricacidunit[J].SyntheticMetals,2019,250:80–84.

[4]ZhangXX,LongQQ,ZhouD,