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质粒提取操作步骤.pdfVIP

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  • 2024-02-05 发布于湖北
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质粒提取操作步骤.pdf

    操作步骤：

    本实验方法适用于从1-10ml过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质

    粒。提取量受菌株、质粒拷贝数、菌液体积和培养时间、培养基类型

    等因素的综合影响。

    1.收菌：将过夜培养（37℃，12-16小时）的菌液于室温≧10,000g

    离心1-2分钟，彻底弃除上清。

    注意：高拷贝质粒建议使用≦5ml菌液；菌液用量过大不仅不能增加质粒产

    量，反而会因裂解不完全或杂质封闭硅胶膜而降低产量；培养时间不宜过长，

    否则会增加开环结构质粒的比例。。

    2.重悬：加入250µl含RNaseA的细胞悬浮液（S1），充分混悬震荡

    或用枪头反复抽打使细

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