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本发明公开了一种高效构建多基因改造酵母菌的方法及其应用。该方法通过两步法融合PCR及巢氏PCR构建得到长度达8000bp以上的长双链DNA目标载体,并将其单链化为长单链DNA目标载体,从而高效成功转化酵母菌,大大缩短了构建载体所需时间,提高了长链DNA转化酵母菌体的成功率和酵母菌的改造效率,步骤简单易操作、耗时短、载体转化效率高,成本低,可广泛用于酵母菌的多基因改造。本发明利用该方法构建了敲除MFO‑2基因并过表达MRD‑2和pUGTB基因的多基因改造熊蜂生假丝酵母菌,其与野生型相比可在更短时间
(19)国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号CN117511986A
(43)申请公布日2024.02.06
(21)申请号202311347892.8
(22)申请日2023.10.17
(71)申请人广州立
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