高三生物一轮复习：动物细胞工程.pptxVIP

是指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法，通过细胞器、细胞或组织水平上的操作，有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品一门综合性的生物工程。根据操作对象的不同，可以分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。一、细胞工程细胞工程植物细胞工程动物细胞工程植物组织培养技术植物体细胞杂交技术动物细胞培养动物细胞融合技术与单克隆抗体动物细胞核移植技术克隆动物

一、动物细胞培养1.动物细胞培养概念：指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。2.动物细胞培养的原理：细胞增殖（有丝分裂）。3.动物细胞培养的地位：动物细胞工程的基础。

4.动物细胞培养条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素……无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境

（1）营养动物细胞在体外培养时，培养基中应含有细胞所需要的各种营养物质。在使用合成培养基培养动物细胞时，通常需加入血清等一些天然成分。（2）无菌、无毒环境（3）温度、PH和渗透压哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。多数动物细胞生存的适宜pH为7.2-7.4。维持适宜渗透压的目的维持细胞正常的形态和功能。（4）气体环境（O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用维持培养液的pH。）通常采用培养皿或松盖培养瓶进行培养。培养方法：将动物细胞置于气体环境为95%空气和5%CO2的CO2培养箱中进行培养。（1）对培养液和所有培养用具进行灭菌处理；（2）在无菌环境下进行操作（可根据实际情况适量添加抗生素）（3）定期更换培养液清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。无菌无毒

动物细胞培养的过程取动物组织分散成单个细胞解决悬浮生长贴壁生长(大多数）细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等接触抑制传代培养用机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理细胞悬液原代培养分瓶培养①原代培养：指动物组织经处理后的初次培养。②细胞贴壁：某些细胞需要贴附于某些基质表面才能增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上。③接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象。④传代培养：分瓶后的细胞培养。加培养液在培养皿或培养瓶内悬浮培养的细胞:直接用离心法收集贴壁细胞:用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，用离心法收集细胞分裂受阻②制成细胞悬液，分瓶培养①收集细胞二

注意2：培养前把细胞分散成单个细胞的原因是：①成块组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长与增殖；②利于与培养液充分接触，保证O2与营养供应和代谢物及时排出。注意3：进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是蛋白质。胰蛋白酶不能换成胃蛋白酶，原因是多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。注意1：动物细胞培养时，应该选择动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，原因是细胞分化程度低，分裂能力强，容易培养。注意4：细胞膜的成分中含有蛋白质，而胰蛋白酶能够水解蛋白质，因此，胰蛋白酶会把细胞消化掉。所以胰蛋白酶处理的时间不能太长。注意5：细胞贴壁的条件是培养瓶或培养皿内表面光滑、无毒、易于贴附。注意6：正常细胞有接触抑制的现象，

思考1.为什么要进行分瓶培养？分瓶培养(传代培养)解决接触抑制细胞密度过大有害代谢物积累营养物质缺乏思考2:进行传代培养(分瓶培养)时，如何处理？离心法收集胰蛋白酶处理制成细胞悬液分瓶培养悬浮细胞贴壁细胞

区分两种“培养”的关键是看用胰蛋白酶处理的对象。①第一次：用胰蛋白酶对剪碎的动物组织进行处理，使其分散成单个细胞后进行培养，为原代培养。②第二次：细胞培养过程中出现接触抑制，用胰蛋白酶使其从瓶壁上脱离下来，然后，将其分散到多个培养瓶中继续培养，为传代培养。

传代培养10代以内：保持正常（可保存）；10～50代：增殖逐渐缓慢，以致于，部分细胞可能发生变化；大于50代：发生，获得性，等同。二倍体核型冷冻完全停止核型突变不死癌细胞传代培养：像这样，将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

细胞株从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质没有发生变化。细胞系传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，具有癌细胞的特点，失去接触抑制