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欧文氏杆菌CXJZ11-01基因组文库构建及木聚糖酶基因克隆的中期报告

欧文氏杆菌CXJZ11-01是一种从金属污染的土壤样品中分离得到的多金属耐受菌株。本研究旨在构建其基因组文库并克隆与木聚糖降解相关的酶基因。

1.材料和方法

1.1材料

欧文氏杆菌CXJZ11-01菌株，QIAampDNAMiniKit，NEBNextUltraDNALibraryPrepKitforIllumina，IlluminaMiSeq测序平台，聚丙烯酰胺凝胶，PCR产物纯化试剂盒，pEASY-T1载体，E.coliBL21(DE3)菌株，IPTG，Kanamycin，TTN1268木聚糖酶基因。

1.2方法

1.2.1基因组DNA提取

使用QIAampDNAMiniKit从欧文氏杆菌CXJZ11-01菌株中提取基因组DNA。

1.2.2基因组文库构建

使用NEBNextUltraDNALibraryPrepKitforIllumina构建基因组文库，并在IlluminaMiSeq测序平台上进行测序。

1.2.3PCR扩增和克隆

使用TTN1268木聚糖酶基因的保守区设计引物进行PCR扩增，并使用PCR产物纯化试剂盒进行纯化。将PCR产物克隆至pEASY-T1载体中并转化至E.coliBL21(DE3)菌株中。

2.结果

2.1基因组文库构建

经过文库构建和测序，得到欧文氏杆菌CXJZ11-01的基因组序列数据，预计覆盖率为50倍，总长度为3.5G。

2.2木聚糖酶基因克隆与序列分析

经过PCR扩增和克隆，得到了TTN1268木聚糖酶基因的DNA序列，并进行了测序验证。序列长度为1,245bp，推测编码415个氨基酸。序列分析表明，TTN1268木聚糖酶基因与具有木聚糖酶活性的菌株中的酶基因高度相似。

3.结论

本研究成功构建了欧文氏杆菌CXJZ11-01的基因组文库，并克隆了与木聚糖降解相关的酶基因。序列分析表明，该酶基因具有潜在的木聚糖酶活性，为后续研究提供了重要基础资料。