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溶血磷脂抗缺血诱导的间充质干细胞凋亡的实验研究的中期报告

近年来，干细胞疗法已成为一种新型治疗方法，特别是间充质干细胞（MSCs）在其恢复和再生能力方面表现出了很大的应用潜力。然而，研究发现在缺血区域进行干细胞治疗时，由于毒性和缺血相关因素的存在，可能会导致其凋亡，从而减轻治疗效果。因此，了解缺血诱导的MSC凋亡机制成为当前研究的热点。

本研究主要采用金标凝集素（LPA）和人血清素（HSA）刺激MSCs，模拟缺血环境，在不同时间段后测量细胞的凋亡率、细胞增殖率和相关分子的表达情况，并探究其内在机制。目前已完成实验的前期和中期阶段，主要包括以下内容：

一、实验材料

1.MSCs：在试验室内体系中培养至第三代。

2.LPA和HSA：通过各种手段制备。

3.MTT：用于测量细胞增殖的试剂。

4.AnnexinV-FITC和PI：用于检测细胞凋亡率的染料。

5.实时荧光定量PCR（qPCR）：用于测量相关分子的表达量。

6.Westernblot：用于测定蛋白质的表达和其翻译率。

二、实验方法

首先，将MSCs分为对照组和实验组，对照组只加入培养基，实验组依次加入不同浓度的LPA和HSA，共进行12、24和48小时的培养。然后，使用MTT法测定细胞增殖率，AnnexinV-FITC和PI染色法测定细胞凋亡率，并使用qPCR和Westernblot法检测信号通路相关分子在不同处理组中的表达情况。

三、初步结果

实验发现，分别加入10μM的LPA和HSA较为明显地抑制了MSC的增殖，而随着时间的延长，细胞凋亡率逐渐增高。同时，通过qPCR和Westernblot测定肌球蛋白、肌红蛋白、Bcl-2、Bax和Caspase-3等相关分子的表达情况，发现LPA和HSA处理组的Bcl-2表达下调，Bax和Caspase-3表达上调。

综上所述，本实验已初步验证了LPA和HSA对MSC凋亡影响的增强作用，并初步揭示了其可能的信号通路内在机制。未来将进一步探究这些信号通路引起MSC凋亡的机制，为缺血性心脏病的治疗提供新的方向。