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Rh血型分型试管法试验标准操作规程

(一)检验目的

检测红细胞表面Rh血型系统C、c、D、E、e抗原表达

情况，为输血相容性检测、Rh系统新生儿溶血病的诊断与预

防等提供参考依据。

(二)检验原理

Rh血型系统单克隆IgM类血型抗体可以使具有相应抗

原的红细胞在盐水介质中发生肉眼可见的凝集，利用单克隆

IgM血型抗体可以鉴定出红细胞表面的Rh抗原。

(三)适用范围

适用于受检者(受者、供者)红细胞表面C、c、D、E、e

抗原鉴定试验。

(四)设备性能参数

参见血清学专用离心机使用说明书。

(五)器材与试剂

1.器材离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mm×

l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。

2.试剂生理盐水、市售单克隆IgM抗C、抗c、抗D、

抗E、抗e及IgM+IgG抗D标准血清。IgM抗D用于临床

样本(受者)RhD血型的常规检测，不能与DIV细胞反应，不

能检测出弱D。IgM+IgG用于供者样本RhD血型的常规检测

及确证试验，能与DIV细胞反应，检测出弱D抗原。10系

或16系谱细胞用于阴阳性对照。

(六)样本要求

1.患者样本EDTA-K；或EDTA-K抗凝全血≥3ml，

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经B600-A型离心机在1760g条件下，离心5分钟，离心后

无溶血、无凝块及明显乳糜。

2.供者标本枸橼酸盐抗凝，全血量≥3ml，经B600-A

型离心机在1760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血、无

凝块及明显乳糜。

(七)校准步骤

参照KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心

机使用说明书中的校准要求执行。

(八)操作程序

1.悬浮红细胞的配制取受检者适量红细胞，经生理盐

水洗涤3次，取压积红细胞配成3％～5％的红细胞盐水悬液。

2.加样取4支洁净硬质试管，分别标记为受检者、阴

性对照、阳性对照、自身对照，前3支试管内分别加入抗C(或

抗c、或抗D、或抗E、或抗e)各1滴，第4支加自身血清(或

血浆)2滴，在每支试管中再加配制好待用的3％～5％受检者

红细胞悬液1滴，混匀。

3.离心血型血清学专用离心机在1000g条件下，离心

15秒。

4.结果判断将试管拿成锐角，缓慢倾斜，使液体反复

冲刷细胞扣，当细胞不再附着在试管上时，继续缓慢地倾斜

和振摇，直到形成均匀的细胞悬液或凝集块。如受检管凝集、

阳性对照管凝集、阴性对照管不凝集、自身对照为阴性，即

表示C(或c、或D、或E、或e)抗原阳性；受检管不凝集、

阳性对照管凝集、阴性对照管不凝集、自身对照为阴性即表

示C(或c、或D、或E、或e)抗原阴性。当出现阳性对照管

不凝集和(或)阴性对照管凝集时，需要更换试剂重复试验。

5.检验结果的输入与确认

(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程

序。

(2)单击“检验”菜单，选择“检验结果录入／修改”，通过

申请序号进行检验结果的录入及修改。

(3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权

人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”

进人结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”(“单张”或

“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经

两人核对无误后按“确认”键进行确认。

(九)质量控制

1.室内质量控制通过增加阳性对照、阴性对照和自身

对照实现室内质量控制。

2.室间质量评价目前只有RhD抗原可以参加卫生部临

检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动，C、c、

E、e抗原检测尚无统一的室间质量评价活动可以参力口。