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中文摘要

盐酸小檗碱抗APEC感染鸡巨噬细胞的作用研究

鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌感染（avianpathogenicEscherichiacoli，

APEC）引起的一种严重威胁养禽业发展的全身性细菌传染病，APEC可经呼吸

道和消化道侵入体内并在体内定殖，可引起肺炎、气囊炎、肺充血以及肺出血等

呼吸系统疾病和败血症、心包炎、肝周炎、输卵管炎、腹膜炎和肠炎等其他全身

性感染。肺巨噬细胞作为肺脏常驻免疫细胞，在协调肺免疫，抵抗APEC感染，

清除侵入的病原体中发挥重要作用。当机体受疾病或环境因素导致机体“卫气”

不足，机体固有免疫巨噬细胞功能降低，APEC趁“虚”而入，引起鸡大肠杆菌

病的发生。因此，调节巨噬细胞活性以抑制APEC感染的肺部炎症成为一种重要

的治疗手段。盐酸小檗碱是中药黄连的主要活性成分，为探究盐酸小檗碱调节巨

噬细胞抗APEC感染的作用，我们建立了APEC感染鸡巨噬细胞的体外模型，探

究了不同温度、不同感染复数以及不同感染时间下APEC对鸡巨噬细胞的感染作

用；其次分析盐酸小檗碱调控鸡巨噬细胞应对APEC感染的能力及机制；最后通

过盐酸小檗碱预处理鸡肺巨噬细胞，探究盐酸小檗碱对APEC诱导鸡肺巨噬细胞

产生胞外诱捕网的调节作用及机理，以揭示盐酸小檗碱调节巨噬细胞抵抗APEC

感染的作用及其机制，为鸡大肠杆菌病的防治和抗感染药物的开发提供研究基

础。

首先，我们为建立APEC感染鸡巨噬细胞的体外模型，通过荧光定量PCR

检测了不同感染复数、不同感染时间以及不同感染温度下禽致病性大肠杆菌感染

HD11细胞后iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10基因相对表达量的变化；使用

Gress法和DCFH-DA法分别检测41℃时不同感染时间和不同感染复数下HD11

细胞生成NO和ROS的变化。结果显示：iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α的基因相

对表达量在0.5~4h呈时间依赖性，并在4h达到峰值（P0.01）；4h时，随着

感染复数升高，iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因相对表达量呈降低趋势。当培

养温度为41℃时，IL-10基因表达水平随着感染程度的增加而升高，感染时间为

I

4h，当MOI=53时IL-10基因表达水平达到最大值；NO及ROS水平在感染早期

显著升高（P0.05），随着感染程度的增加而有所降低；4种促炎基因相对表达

量显著高于37℃（P0.05），当MOI=51时，其基因相对表达量达到最大值

（P0.01）。因此，选择感染复数为MOI=51，感染时间为4h，感染温度为41℃

作为禽致病性大肠杆菌体外感染鸡巨噬细胞模型的感染条件。

然后为探究盐酸小檗碱调节鸡巨噬细胞应对APEC感染的抗炎机制，我们通

过检测药物细胞毒性以及最小抑菌浓度（MIC），确定了对APEC生长无影响且

对HD11无细胞毒性的盐酸小檗碱浓度为0~30μM；然后检测盐酸小檗碱7.5μM、

15μM、30μM对APEC感染鸡巨噬细胞引起的炎症及MAPK、NF-κB信号通路

的影响。结果表明，7.5μM、15μM、30μM盐酸小檗碱可以显著降低促炎基因

IL-1β、IL-6、TNF-α基因的相对表达，并抑制MAPK（JNK、ERK1/2、p38）以

及NF-κB（p65、IκB）信号通路的磷酸化。这些结果表明，盐酸小檗碱可以通过

调节APEC感染引起的M1极化，从而通过MAPK以及NF-κB降低APEC感染

鸡巨噬细胞HD11后炎症基因表达水平。

最后为探究盐酸小檗碱对APEC诱导鸡肺巨噬细胞产生胞外诱捕网的影响，

我们通过肺部灌洗获取鸡肺巨噬细胞后，以APEC诱导鸡肺巨噬细胞产生胞外诱

捕网，通过检测小檗碱处理后鸡肺巨噬细胞产生胞外诱捕网的能力及MAPK表

达情况。结果表明APEC可诱导鸡肺巨噬细胞产生胞外诱捕网结构，盐酸小檗碱

可通过ERK1/2、p38MAPK信号通路减轻肺巨噬细胞诱捕网的产生。