生化技术凝胶过滤.pptVIP

一、基本原理凝胶过滤层析所用的基质是具有立体网状结构、筛孔直径较一致，且呈珠状颗粒的物质。这种物质可完全或部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外，而小分子化合物则可以在筛孔中自由扩散和渗透。某种组分凝胶层析柱中被排阻的程度用表示洗脱体积；外水体积；凝胶床体积在一定层析条件下，和均为固定值，而随着被分离物分子量的变化而变化。组分分子量越大，则洗脱更容易（排阻越多），越小，越小第25页，课件共70页，创作于2023年2月各组分间的值差异越大，分离效果越好；差异越小,则分离效果很差，或根本无法分离流出物用部分收集器等量或等时收集，检测后分段合并相同组分的各管流出物，得到分子量不同的各种组分第26页，课件共70页，创作于2023年2月1、当Kav=0时，则Ve=Vo，即对于根本不能进入凝胶内部的大分子物质全排阻，洗脱体积等于空隙体积即外水体积（图中组分Ⅰ）2、当Kav=1时，Ve=Vo+Vi。即小分子可完全渗入凝胶内部时，洗脱体积应为空隙体积与内水体积之和。Ve=Vo+Vi（图中组分Ⅲ）第27页，课件共70页，创作于2023年2月3、当0＜Kav＜1