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影响转化率的因素

摘要：通过从载体DNA方面、重组DNA方面、受体细胞方面、转化方法及转化方法操作

方面来探讨影响转化率的因素。

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关键词：转化、转化率、载体、重组DNA、受体细胞、Ca诱导转化法、电穿孔转化法、

三亲本杂交结合转化法、PEG介导的细菌原生质体转化。

重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入细菌受体细胞，并在受体细胞内稳定

维持和表达的过程称为转化。转化的广义概念则指细菌细胞从周围介质中吸收

DNA而发生基因型改变的生命现象。

转化率是指DNA分子转化受体菌获得的转化子的效率。通常有两种形式表征转

化率，当待转化DNA分子数大于受体细胞数的条件下，转化子数与用于待转化处

理的DNA分子数或质量的比例；转化率的另一种表示形式是在受体细胞数相对于

转化DNA分子数大大过量时，转化子数与用于转化处理的受体细胞的比例。

实际上转化并不限于实验室内发生，它也可以在自然状态下发生。曾在肺炎双

[1]

球菌、枯草芽孢杆菌、嗜血流感杆菌中发现。只是在自然条件下发生转化的

细菌种类较少，即使发生了转化，转化效率也较低。下面重点探讨影响转化率的

因素，转化率的影响因素包括以下四个方面：

1.载体DNA方面

2.重组DNA方面

3.受体细胞方面

4.转化方法及转化方法操作方面

1.1载体本身的性质决定了转化率的高低，不同载体转化同一受体细胞，其转

化率明显不同。这根本上取决于载体的类型和其空间构象。载体的类型方面：与

受体细胞亲和性较强的载体进行转化时，其转化率明显比与受体细胞亲和性较低

的载体高。载体的空间构象方面：与开环结构或线性结构的质粒载体相比，自然

双螺旋闭环结构的质粒载体的转化率较高。此外，经体外酶切酶连操作后的载体

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DNA由于空间构象很难恢复，其转化率比具有超螺旋结构的载体质粒低两个数量

级。

2.1对同一受体细胞而言不同的重组DNA分子在其进行转化时转化率高低也

不同。往往是：分子质量大的重组DNA分子的转化效率比分子质量小的重组DNA

分子高，并且分子质量大于30kb的重组DNA是很难进行转化的。

2.2重组DNA分子的浓度度和纯度都会对转化率产生影响。在10ng/100ul以

下的浓度范围内，DNA分子数越多，则转化率也越高，反之亦然。

3受体细胞的选择对重组DNA分子的转化是很重要的一方面。当同一重组质粒

DNA分子转化不同的受体细胞时转化率不同。野生型细菌细胞往往不能用作基因

工程的受体细胞。这是由于野生型细菌种属存在特异性的保护系统——限制与修

饰系统，该系统作用的发挥分别由限制性核酸内切酶和修饰甲基化酶来完成的。

当外源DNA分子进入细菌细胞时，限制系统就会产生限制作用，将来自不同生物

[2]。

的外源DNA分子或重组DNA分子降解破坏而对于自身DNA分子则由修饰系统

[3]

以甲基化修饰，于限制系统的限制作用。这将直接使转化率大大降低，

所以往往通过诱变手段对野生型细菌进行遗传性状改造，使之具备：限制缺陷型

或遗传缺陷型或重组缺陷型或转化缺陷型或遗传互补型或感染寄生缺陷型。

3.1具备限制系统缺陷型受体细胞对转化率的提高有利

以从大肠杆菌C600株中提取的质粒DNA转化大肠杆菌K12株为例。当开始转

化时大肠杆菌K12的限制系统会切开为经自身修饰系统修饰的质粒DNA，使之不

能在细胞中有效复制，因此转化率通常很低。同理，来自不同生物的外源DNA

或重组DNA转化野生