腺相关病毒（AAV）包装技巧.pdfVIP

腺腺相相关关病病毒毒（（AAV））包包装装技技巧巧

上⽂已经介绍了腺相关病毒的基础知识，具有如此多优点功能如此强⼤的腺相关病毒是如何⽣产的？本⽂将为

⼤家揭开腺相关病毒⽣产的神秘⾯纱。

腺相关病毒⽣产流程⼤致可分为基因克隆细胞转染收毒病毒纯化滴度检测等步骤，具体步骤我们下⽂分

解？怎么可能，下⾯就是腺相关病毒⽣产流程。

腺腺相相关关病病毒毒重重组组克克隆隆载载体体构构建建

1）根据订单不同选择不同的载体，在此以⼈源基因克隆为例。

2）Vigenebio公司的AAV载体与我们的⼈源ORF（注：维真⽣物拥有18000⼈源cDNAORF克隆，可以最快的

时间克隆到载体）库中的穿梭质粒的多克隆位点相兼容，通过酶切，连接，转化的⽅式将基因亚克隆进⼊pAV-FH

AAV载体，得到阳性克隆之后进⾏酶切跑胶验证及测序以确认插曲⽚段的正确性。

细细胞胞冻冻存存流流程程

1)按照培养细胞流程，将细胞吹下来加⼊50ml离⼼管中，800g离⼼5min。

2)配制冻存液，90%⾎清，10%DMSO，混匀。

3)离⼼后去上清，将配制的冻存液加⼊，将细胞吹匀

)取