T_TBD 002-2023 微生物菌种纯化操作技术规范.docxVIP

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T/TBD?002—2023

微生物菌种纯化操作技术规范

Technical?specification?for?purification?of?microbial?strains

2023?-?12?-?13?发布 2023?-?12?-?18?实施

保定市肥料协会??发?布

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前 言

本文件按照GB/T?1.1—2020《标准化工作导则??第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由微生物肥料技术研究推广中心提出。

本文件由保定市肥料协会归口。

本文件起草单位：微生物肥料研究技术推广中心、保定市肥料协会、保定市绿特生物科技有限公司、

中农可信（河北）农业技术有限公司、溯朴农业科技保定有限公司、保定市竞秀区新云家庭农场、河北

丰植肥料有限公司。

本文件主要起草人：孟庆鑫、孟庆伟、白小波、宋金秀、卢鹏程、李凤云、王小峰。

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微生物菌种纯化操作技术规范

1?范围

本文件规定了微生物菌种纯化操作技术的方法。

本文件适用于纯化微生物，得到菌种的处理技术方法。

2?规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T?3833 微生物肥料菌种保藏技术规范

SN/T?5550 土壤中检疫性真菌的分离、培养方法

NY/T?1114-2006 微生物肥料实验用培养基技术条件

DB/T?3168-2022 盐碱土壤嗜盐细菌与古菌资源分离与快速分类技术规程

3?术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

菌种?strain

用于发酵过程作为活细胞催化剂的微生物，包括细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类。来源于自然

界大量的微生物，从中经分离并筛选出有用菌种，再加以改良，储存待用于生产。

3.2

纯化?purification

由多种物质的聚集体，通过物理、化学或生物方面的方法作用，变成一类或一种物质的过程。

3.3

菌种纯化?purification

把混合菌落里的菌分离，长出单菌落，这个时候获得的菌就是纯种的菌，这个过程可以叫菌种纯化。

4?菌种纯化方法

4.1?平板表面划线法

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平板划线法是指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单菌落的方法。一般是讲混杂在一起的

不同种微生物或同种微生物群体中的不同细胞，通过在分区的平板表面上作多次划线稀释，形成较多的

独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯

种”。

4.2?浇注平板法

浇注平板法是将待分离的试样用生理盐水等稀释液作梯度系列稀释后，取其中一合适稀释度的少量

菌悬液加至无菌培养皿中，立即倒入融化的固体培养基，经充分混匀后，置室温下培养。最后可从其表

面和内层出现的许多单菌落中，选取典型代表，将其转移至斜面上培养后保存，此即为初步分离的菌种。

4.3?涂布平板法

涂布平板法是指取少量梯度稀释菌悬液，置于已凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布玻

棒把菌液均匀地涂布在整个平板表面，经培养后，在平板培养基表面会形成多个独立分布的单菌落，然

后挑取典型的代表移接斜面，经培养后保存。

5?注意事项

（1）用于划线的接种环，环柄宜长些（约10cm），环口应十分圆滑，动作要轻巧，以防划破平板；

（2）用于平板纯化的培养基，琼脂含量宜高些（2%左右），否则会因平板太软而被划破；

（3）平板不能倒得太薄，最好在使用前一天倒好。为防平板表面产生冷凝水，倒平板前培养基温

度不能太高。

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