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BL21(DE3)pLysS感受态细胞使用说明

BL21(DE3)pLysS感受态细胞使用说明

感受态细胞在生物技术领域中扮演着重要的角色，能够有效地表达

外源蛋白，并被广泛应用于蛋白质表达、抗体产生、酶工程等方面。

BL21(DE3)pLysS是一种常用的感受态细胞系，本文将对其使用说明进

行详细介绍。

一、BL21(DE3)pLysS细胞的特点

BL21(DE3)pLysS细胞是一种缺失棘突病毒抗性基因（lysozyme）

的感受态大肠杆菌细胞系。该细胞系具有以下特点：

1.能够高效表达外源蛋白，产量较高，适用于大规模蛋白质表达。

2.具备感受态特性，能有效产生T7RNA聚合酶，并且对T7启动

子响应较高。

3.细胞表面表达了T7RNA聚合酶抑制蛋白（LysS），能够抑制内

源性T7RNA聚合酶的活性，避免了胞内T7RNA聚合酶的自主大量表

达。

二、感受态细胞的培养条件

BL21(DE3)pLysS感受态细胞的培养条件与常规大肠杆菌细胞类似，

但需要特别留意以下几点：

1.培养基的选择：常用的培养基有LB、TB等。推荐使用TB培养

基，因其含有较高浓度的氨基酸和糖源，可促进蛋白表达。

2.抗生素选择：推荐添加适量的抗生素（如氨苄青霉素、克林霉素

等）以维持感受态细胞的稳定性。

3.培养温度和转入T7RNA聚合酶的方式：通常将感受态细胞在37℃

下培养至对数期后，加入适量IPTG等诱导剂，激活细胞中的T7RNA

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聚合酶基因表达。也可以在低温（如℃）下诱导，有助于获得可溶

性的重组蛋白。

4.培养时程：培养时程根据不同的蛋白表达情况而定，通常是在对

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数期至滚筒培养的小时内进行表达。

三、蛋白表达与纯

BL21(DE3)pLysS细胞的主要应用之一是进行外源蛋白的表达和纯

。下面是一般的表达和纯步骤：

1.定义目标蛋白：确定所需表达的外源蛋白序列，并构建相应的重

组质粒。

2.转重组质粒：将构建好的重组质粒转到感受态细胞中，通过

进行抗生素筛选，获得含重组质粒的菌落。

3.培养感受态细胞：选择合适的培养条件和培养时间，使细胞进入

到适宜的表达状态。

4.诱导表达：向培养基中添加适量的诱导剂（如IPTG）激活T7

RNA聚合酶的表达。

5.细胞破碎：采用适当的方法（如超声波破碎、学破碎等）破碎

细胞膜，释放重组蛋白。

6.蛋白分离与纯：利用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤等技

术手段，将目标蛋白分离纯。

四、质粒构建与转

BL21(DE3)pLysS感受态细胞适合进行重组质粒的构建与转。以

下是一般的操作步骤：

1.提取感受态细胞：将感受态细胞通过高温处理后，提取细胞中的

质粒。

2.重组质粒构建：选择合适的质粒骨架，并将目标基因插入到质粒

中。

3.转感受态细胞：通过热激转、电穿孔转等方法将构建好的

重组质粒转到感受态细胞中。

4.筛选转子：将转后的细胞接种于含有适量抗生素的寒武纪平

板上，通过筛选可得到含有重组质粒的感受态细胞。

五、感受态细胞的保存与收获

为了保证感受态细胞的质量和稳定性，应采取适当的保存和收获方

法。下面是一些建议：

1.冷冻保存：将感受态细胞悬浮液和复苏液加入等体积的15%甘油

中，分装于小管中，密封并快速冷冻保存。

2.快速冷冻保存：将感受态细胞混合液滴于液氮上，迅速冷冻保存。

3.短期保存：将感受态细胞培养液在4℃下保存，保留其感受态特

性。

4.长期保存：将感受态细胞分装于琼脂糖/冰乙醇载体中，通过凝胶

冻存技术长期保存。

BL21(DE3)pLysS感受态细胞在外源蛋白表达和纯方面具备独特

的优势，是一种重要的工具细胞系。通过正确理解和使用

BL21(DE3)pLysS细胞，可以提高蛋白质表达的效率和纯度，为生物技

术研究提供有力支持。在使用过程中，请遵守相关实验室规范和操作

规程，合理控制风险，并根据实际情况进行相应的优。