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慢病毒

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来

的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染

能力。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常

深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色

体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效

地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、

内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好

的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效

果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究

中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细

胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表

达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够

表达siRNA的载体,然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的

细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达

载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。在所构建的siRNA表达载体

中，是由RNA聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶Ⅲ有明确的

起始和终止序列，而且合成的RNA不会带polyA尾。当RNA聚合酶Ⅲ遇到连续4个

或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3’端形成1~4个U。U6和H1RNA

启动子是两种RNA聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的

上游，适合于表达～21ntRNA和～50ntRNA茎环结构（stemloop）。在siRNA表达载

体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录,然后两条链互补结合

形成siRNA；也可由载体直接表达小发卡状RNA(smallhairpinRNA,shRNA),载体包

含位于RNA聚合酶Ⅲ启动子和4～5Ｔ转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可

折叠成具有1~4个U3’突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。构建载

体前通常要通过合成siRNA的方法，寻找高效的siRNA，然后从中挑选符合载体要求

的序列，将其引入siRNA表达载体。

慢病毒载体（Lentiviralvector）较逆转录病毒载体有更广的宿主范围，慢病毒能够

有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的

慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA，

实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代

的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生特定基因表达降低的动物

提供了可能性。慢病毒作为siRNA的携带者，不但具备特异性地使基因表达沉默的能

力，而且充分发挥了慢病毒载体自身所具备的优势，为基因功能的研究提供了更强有力

的工具。

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒

可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高

滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的

包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用

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于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而

高水平的表达效应分子。

这一系统的目的，主要是为了解决以下问题：

●对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高

目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为

RNAi,cDNA克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径。

●进行稳转细胞株的筛选；

●为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液；

在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通

过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。