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动物药材分子鉴别现状与策略△

黄璐琦，袁媛，蒋超，田晓轩

(1.道地药材国家重点实验室培育基地，中国中医科学院中药资源中心北京

100700；2.天津中医药大学天津300193)

·专题·

动物药材分子鉴别现状与策略△

黄璐琦1*，袁媛1，蒋超1，田晓轩2

(1.道地药材国家重点实验室培育基地，中国中医科学院中药资源中心北京

100700；2.天津中医药大学天津300193)

笔者于2011年提出的动物药分子鉴定的策略与目标已初步完成，即先后提出中药分子鉴定原则、研制推出动物药材分子鉴定试剂盒、发展中国动物药材DNA条形码及其标准鉴定数据库。本文在此基础上，进一步对近5年动物药材分子鉴别的科研、技术、产业化发展现状与问题进行总结，提出进一步加强动物分类学基础研究、扩大研究品种，完善基础数据库建设，针对关键技术难点开发更为有效、快速的检测方法，促进标准制定或修订和产业化发展等策略。

动物药材；分子鉴定；关键问题；核心技术

动物药材在中医药行业中具有重要地位，《中华人民共和国药典》2010版(以下简称《中国药典》)收载了蕲蛇、乌梢蛇的特异性PCR鉴别方法，成为中外药典收载的第一个中药分子鉴定方法，标示着DNA鉴定手段已从实验室进入了广泛应用阶段[1]。2011年作者曾对动物药材分子鉴定研究的现状及问题进行了总结和分析，并提出扩大研究品种、加快动物药材分子鉴定试剂盒的研制和推广，全面启动动物药材DNA条形码研究计划，建立动物药材分子鉴定标准数据库等研究策略等[2]。在过去的5年里，随着分子生物学技术的发展和分子鉴定理论不断完善，中药分子鉴定原则的提出，中国动物药材DNA条形码的发展与分子鉴定数据库的建立，相继研制推出了蕲蛇、乌梢蛇、冬虫夏草等动物药材分子鉴定试剂盒，表明2011年提出的动物药分子鉴定的策略与目标已初步完成。目前已通过DNA分子标记鉴定的动物药材包括土鳖虫、地龙、蜈蚣、水蛭等虫类；蛤壳、珍珠母等介类；金钱白花蛇、乌梢蛇、蛤蚧等蛇蜥类；龟甲、穿山甲、鹿茸、鹿角、羚羊角、鳖甲等角甲类；阿胶等胶霜类；麝香、蛇胆等囊胆类；桑螵蛸等外分泌物类药材以及海龙、海马等海洋药物(详见表1)。动物药材DNA分子鉴定技术开始呈现多样性，鉴定范围从属、种鉴别扩大到居

群、品种与产地，检测材料也从原动物、药材、饮片扩大到中成药，鉴定需求正在逐步从定性检测向定量检测方向发展。

动物药材分子鉴定关键问题

动物分类学基础及分子鉴定标准化

动物药材的分子鉴定，首先依赖于对其原动物进行准确的分类学鉴定。然而不同种类动物的分类学研究进展存在严重的不平衡，如相对于鸟类、兽类等大型动物，昆虫等无脊椎动物的分类研究进展缓慢，导致其物种的区分、鉴定和命名工作远未完成。加之世界范围传统分类学研究人员的缺乏，且如不具备相关形态学经验，仅依靠检索表难以完成动物的准确分类鉴定，也造成部分动物药材的原动物分类基础薄弱。

另一方面，在获取标准动物药材之后，还需采取标准化手段建立动物药材分子鉴定方法。以动物通用条形码标记COⅠ为例，根据国际生命条形码数据标准，每个DNA条形码都要有完整的凭证标本信息、采集信息和测序峰图的原始文

件，且应及时上传生命条形码数据系统(BOLD，http：///)和/或GenBank(http：///genbank/)数据库。而事实上，早期分类学研究团队发表的数据常不能严格执行以上要求，导致后续以此类研究为基础的动物药材分子鉴定工作，存在假阳性或假阴性可能。

目前在已完成《中国药用动物志》的基础上，中国动物药材DNA条形码研究计划制定了统一的“药用动物DNA条形码试验样品采(收)集规范”，以及实验研究基本路径和实施方案；通过各协作组专家、同仁的齐心努力，已顺利完成了蛇类、蛤蚧类、哈蟆油类、龟甲类、水蛭类、海马类、鱼类、虻虫类、桑螵蛸、斑蝥、鹿茸类、羚羊角类等十二大类正品及其伪混品之分子系统学及COⅠ和或/CytbDNA条形码鉴定研究，以期为动物药材准确、快速鉴定奠定理论与技术基础。

种下水平鉴定问题

与植物药类似，在动物药(如阿胶)中同样存在道地药材鉴别、野生与家养品鉴别等难题。而目前最为通用的动物DNA条形码技术是物种水平鉴定的工具，其分子标记的选择可有效区分同属近缘物种。而针对种下水平(如不同地理居群、品种与产地)，随着高通量测序技术普及，可依赖基因组(包括线粒体基因组)、转录组数据，设计开发新的分子标记。且细胞器基因组本身，也有望作为“超级条形码”，解决快速分化的近缘物种鉴定问题[3]。

表1部分代表性动物药材DNA分子鉴定汇总

表1(续)

表1(续)

动物药材分子鉴定研究现状

目前中药分子鉴定技术，较为公认的方式有3类[6