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主题二微生物的数量测定情境探究土壤中含有能分解尿素的细菌,每克土壤样品中含有多少这样的细菌?下图A、B分别是平板划线法和稀释涂布平板法获得的平板,请结合教材探究·实践“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”,回答下列问题。第1章第2节第2课时微生物的选择培养和计数学习目标1.能够运用生物与环境相适应的观点来理解选择培养的原理。2.学会通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物。3.掌握测定微生物数量的常用方法。4.掌握土壤中尿素分解菌的分离与计数实验,培养科学探究能力。基础落实·必备知识全过关重难探究·能力素养全提升目录索引基础落实·必备知识全过关知识点一选择培养基1.原理:人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度和pH等),同时抑制或阻止其他微生物的生长。?2.作用:利用选择培养基分离微生物。(1)选择培养基:在微生物学中,允许的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。?(2)实例:①聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶,是从热泉中筛选出来的水生栖热菌中提取出来的,因为水生栖热菌能在℃的高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。?②选择分解尿素的细菌的培养基,以作为唯一氮源,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。?目的菌特定种类70~80尿素知识点二微生物的选择培养90等比0.1酒精酒精燃尽冷却吸收倒置恒温培养箱单菌落知识点三微生物的数量测定1.方法一:稀释涂布平板法(1)原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。(2)计数原则:一般选择菌落数为的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目。在同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值。?30~3002.方法二:显微镜直接计数法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下观察、计数,然后计算一定体积的样品中微生物的数量,统计的结果一般是的总和。?活菌数和死菌数3.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)土壤取样:从富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿的土壤取样,在距地表3~8cm的土壤层取样。取样时一般要铲去表层土。(2)样品的稀释Ⅰ.稀释原因:样品的直接影响平板上生长的菌落数目。?Ⅱ.稀释标准:选用一定稀释范围的样品液进行平板培养,保证能从中选择出菌落数为30~300的平板进行计数。(3)微生物的培养与观察Ⅰ.培养:不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。本实验中一般将培养皿放入30~37℃的温度下培养1~2d。Ⅱ.观察:每隔24h统计一次菌落数目,最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。稀释度(4)操作提示Ⅰ.无菌操作a.取土样的用具在使用前都需要灭菌。b.实验操作均应在酒精灯火焰附近进行。Ⅱ.做好标记:本实验使用的平板和试管较多,为了避免混淆,最好在使用前做好标记。例如,在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。Ⅲ.制订计划:对于耗时较长的生物实验,需要事先规划时间,以便提高实验效率,在操作时有条不紊。旁栏边角想一想1.[教材P16思考·讨论]分离分解尿素的细菌的培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?2.[教材P18相关信息]细菌计数板和血细胞计数板的计数原理和应用范围是否相同?提示分离分解尿素的细菌的培养基与普通培养基相比,只是用尿素作为唯一氮源,培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。提示二者的计数原理相同。血细胞计数板比细菌计数板厚,常用于酵母菌细胞、霉菌孢子等相对较大细胞的计数;细菌计数板可对细菌等较小的细胞进行观察和计数。3.[教材P20拓展应用]反刍动物,如牛和羊,具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解尿素。请你设计一个实验,从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物。4.[教材P20拓展应用]有同学说,可以把滤纸埋在土壤中,经过一段时间后,再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。请你评价这一做法。提示由于瘤胃中的微生物多为厌氧细菌,接触空气后便会死亡,因此分离其中能分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基,还应该参照厌氧细菌的培养方法进行实验设计。提示这是人工设置适合纤维素分解菌生存的环境,腐烂的滤纸上很可能含有纤维素分解菌。结论语句辨一辨(1)选择培养基只允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物的生长。()(2)以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基。()(
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