化学纤维 儿茶素含量的测定 高效液相色谱法 征求意见稿.docxVIP

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化学纤维儿茶素含量的测定高效液相色谱法

警告：使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件描述了采用高效液相色谱法测定儿茶素改性纤维中儿茶素含量的方法。

本文件适用于含有儿茶素活性成分的化学纤维的儿茶素含量的检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3试验原理

利用甲醇萃取纤维样品中的儿茶素类活性成分，利用高效液相色谱法进行儿茶素类活性成分的定性定量分析。

4试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T6682规定的一级水。

4.1儿茶素类标准物质：儿茶素（CAS登录号154-23-4）、表儿茶素（CAS登录号490-46-0）、表没食子儿茶素（CAS登录号970-74-1）、表儿茶素没食子酸酯（CAS登录号1257-08-5）、表没食子儿茶素没食子酸酯(CAS登录号989-51-5)，色谱纯，纯度≥98%。

4.2试剂：甲醇，甲酸，甲酸铵，乙腈，色谱纯。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪（HPLC）：配置SPD-M40二极管阵列检测器。

5.2天平：实际分度值0.1mg。

5.3螺纹口样品瓶：2mL，可用于高效液相色谱自动进样，配套聚四氟乙烯内垫。

5.4超声波清洗仪：功率400W，频率40kHz，配500mL提取瓶。

5.5布氏漏斗、抽滤瓶。

5.6定性滤纸：不含脂，中速。

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5.7旋转蒸发仪：配旋蒸瓶。5.80.45μm微孔滤膜。

5.9量筒。

5.10刻度移液管或移液枪：1mL。

5.11容量瓶：500mL。

6试验步骤

6.1试样准备

称取无油纤维或者去除油剂之后的纤维约5g，剪成约0.2cm长短的碎片，作为待测样品。

6.2试样萃取

用天平称取(5.0g±0.01g)待测样品，记录质量m，放入500.0mL的超声波提取瓶（5.4）中，量取150.0mL甲醇倒入提取瓶中浸泡约12h，超声30min，摇匀。提取瓶中的萃取液经布氏漏斗（5.5）抽滤，再用甲醇洗涤提取瓶三次，每次10.0mL，滤液倒入旋转蒸发仪的旋蒸瓶（5.7），进行旋蒸，旋蒸条件为35℃减压旋干，旋蒸瓶内的浓缩物用2.0mL甲醇复溶，超声2min～3min后，用0.45μm微孔滤膜（5.8）将复溶液过滤至2.0mL螺纹口样品瓶（5.3）中供仪器分析用。

6.3绘制标准工作曲线

用甲醇配制系列标准曲线，C、EC、ECG、EGC和EGCG标准曲线浓度为：0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.50μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL和20.00μg/mL。

以色谱峰面积为纵坐标，已知被测物质量浓度为横坐标，绘制工作曲线，线性相关系数应不小于0.99。

在测试线性范围内，可以配制其他浓度范围的标准溶液。

6.4样品测试

将按6.2处理好的样品溶液进行高效液相色谱检测。根据6.3建立的标准曲线，外标法计算样品中儿茶素类物质的含量。

由于测试结果取决于所使用的仪器，因此不可能给出色谱分析的全部参数。采用下列操作条件已被证明对测试是合适的：

a)色谱柱：Acclaim?PolarAdvantageIIHPLC色谱柱（4.6mm×250mm×5μm），或相当者；b)流动相流速：1.0mL/min；

c)柱温：30℃;

d)进样量：10.0μL；

e)紫外检测波长：278nm；

f)流动相A：分别将25mL水、0.189mL甲酸和0.0631g甲酸铵加入到500mL容量瓶（5.11）中，用乙腈定容至刻度，摇匀，使用前过0.45μm微孔滤膜（5.8）并超声1小时；

g)流动相B：分别将0.189mL甲酸和0.0631g甲酸铵加入500mL容量瓶（5.11）中，用水定容至刻度，摇匀，使用前过0.45μm微孔滤膜（5.8）并超声1小时；

h)流动相运行梯度如表1所示。

表1流动