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离体蛙心灌流

一、 实验目的

1、 学习离体蛙心灌流的方法；

2、 观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。

3、 观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。

二、 动物与器材

动物：蟾蜍

器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液

三、 方法与步骤

1、 离体蛙心的制备：双毁髓f左主动脉结扎f左右两主动脉下方活结备用一剪口，插管（管内盛任氏液与肝素）一结扎备用线（套管+左右主动脉）f剪断动脉f结扎并剪断静脉。

2、 固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。

3、 观察并记录正常心搏曲线；

4、 向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d、5%NaCl溶液2d、1%KCl溶液1-2d、2%CaCl2溶液1d、1:5000肾上腺素溶液1-2d、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d），观察并记录曲线变化。

四、 注意事项

制备蛙心标本时，勿伤静脉窦；

各溶液作用一旦出现，应立即用新鲜任氏液换洗，以免心肌受损，而且待心跳恢复正常后方能进行下一步实验；

蛙心插管内液面应保持恒定；

每次更换或滴加溶液必须做标记；

五、 实验结果：

实验项目 实验现象

0.65%NaCl 加入后心搏曲线振幅变小

5%NaCl 心搏曲线振幅下降，达正常曲线振幅一半

以下（图二）更换溶液后恢复，（图三）但恢复后曲线振幅减小。

2%CaCl2 心搏曲线振幅首先变大（图三）然后出现

异常的停止搏动。

1%KCl 后期心肌停止搏动于舒张期（图四）

肾上腺素 心搏曲线幅度明显增大（图五）

更换溶液后恢复正常水平

乙酰胆碱 心搏曲线振幅急剧下降，最后达基线以下

0搏动

（实验图另附）

由于实验操作上及设备仪器等存在误差，记录曲线有一定偏差。且由于只记录了部分曲线，蟾蜍心脏有时又会出现异常停搏现象，所以所记录结果未能完整反映出不同溶液对心搏曲线影响情况。

六、讨论：

1、 作为蛙心起搏点的静脉窦能按一定节律自动产生兴奋。因此，只要将离体失去神经支配的蛙心保持在适宜的环境中，在一定时间被仍能产生节律性兴奋和收缩。

2、 心脏正常的节律性活动有赖于内环境理化因素的相对稳定，所以，改变灌流液的成分，则可以引起心脏活动的改变。由实验现象可知：肾上腺素溶液有加剧心脏的搏动，NaCl溶液、KCl溶液、CaCl2溶液、1乙酰胆碱均会阻竭心脏搏动。肾上腺素：主要与心肌的。1受体结合，产生正性变时、变力和变传导效应。乙酰胆碱：与心肌细胞他2受体结合，产生负性变时、变力和变传导效应。

3、 心肌动作电位的产生和传导是以Na+、K+、Ca2+三种离子活动为基础的。其对心肌收缩影响机理如下：

NaCl灌流：NaCl——细胞外液Ca2+浓度下降——心肌细胞动作电位期间Ca2+内流减少一一心肌细胞胞浆Ca2+浓度下降一

—心肌收缩力减小。

KCl灌流：细胞外液K+浓度轻度升高——膜内一外K+浓度梯度减小——静息电位与阈电位水平的电位差减小——心肌细胞兴奋性升高。

细胞外液K+浓度显著升高——膜内一外K+浓度梯度减小——静息电位绝对值减小至-55mV——Na+通道失活——心肌细胞兴奋性丧失一一心脏停止搏动于舒张状态。CaCl2灌流：细胞外液Ca2+浓度显著升高——Ca2+内流增加——肌浆Ca2+浓度升高——Ca2+与钙蛋白结合数量增多——肌心肌收缩力增大。