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血红密孔菌漆酶的纯化及其基因在毕赤酵母中的表达的任务书
任务概述:
本次任务旨在纯化血红密孔菌漆酶并进一步研究其基因在毕赤酵母中的表达。任务将分为两个部分进行,第一部分为血红密孔菌漆酶的纯化,第二部分为基因表达的实验。
任务步骤:
1.血红密孔菌漆酶的纯化
(1)收集血红密孔菌菌丝
(2)制备菌丝提取液,利用超声波破碎细胞壁
(3)利用离心和滤纸等工具去除残余杂质
(4)利用层析技术分离酶
(5)通过SDS确认纯化酶的分子量及纯化程度
2.基因表达的实验
(1)制备毕赤酵母质粒
(2)将血红密孔菌漆酶基因克隆到毕赤酵母质粒上
(3)转化毕赤酵母
(4)利用Westernblot检测表达酶的数量及产物纯度
(5)在不同条件下研究酶的表达情况
任务考察点:
1.现代生物技术的操作能力,如细胞破碎、层析及分离等
2.蛋白质检测方法及数据分析能力
3.基因表达系统的构建、检测及优化能力
4.有关酶的性质、应用及生物反应器等的基础知识掌握程度
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