《葡萄酒微生物实验》教学大纲.doc

《葡萄酒微生物学实验》教学大纲

ExperimentsofWinemicrobiology

课程代码：BK065012学时：16学时学分：0.5学分

适用专业：课程性质：必修

一、实验课的性质与任务

本课程的对象是葡萄与葡萄酒专业（本科），葡萄酒微生物实验是该专业的重要专业课之一；主要任务是巩固学生葡萄酒微生物理论，提高学生应用基础理论知识的能力，即查阅、动手、观测、分析、思考、设计和表达能力，教学内容上重在使学生掌握葡萄酒微生物的定性、定量分析的基本理论，掌握常用的实验方法。注重从事理论研究、实验工作的能力和生产的结合，严谨的科学作风和创新精神的培养。

二、实验目的与要求

通过课程的实验，加深对葡萄酒微生物学基础理论、基本知识的理解，正确和较熟练地掌握葡萄酒微生物学实验、实习技能，提高观察、分析和解决问题的能力，培养学生严谨的工作作风和实事求是的科学态度，为学习后继课程和未来的研究及实际工作打下良好的基础。

三、实验项目设置情况

序号

实验项目名称

学时

开出要求

实验项目类型

必做

选做

基础型

综合设计

研究创新

演示

验证

1

酵母、醋酸菌和乳酸菌形态的观察

3

√

√

2

物理、化学因素对酵母的影响

3

√

√

3

酵母菌的直接计数

3

√

√

4

污染葡萄酒中微生物培养

3

√

√

5

酵母繁殖方式观察

2

√

√

6

葡萄酒中常见霉菌的培养观察

2

√

√

四、各实验项目教学内容

实验项目一：酵母、醋酸菌和乳酸菌形态的观察3学时

（一）实验目的要求

观察酵母、醋酸菌和乳酸菌的个体形态

观察假丝酵母的菌体结构、假菌丝。

（二）实验材料和仪器设备

接种针、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片、吸管、显微镜、镊子、恒温培养箱。

（三）实验内容

真菌是具有真正细胞核的真核生物，本部分主要介绍如何观察酵母菌的显微形态结构。

酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核和细胞质有明且分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状的假菌丝。

革兰氏染色技术

实验项目二：物理、化学因素对微生物的影响3学时

（一）实验目的要求

观测氧气、温度、对微生物生长的影响

（二）实验材料和仪器设备

培养皿、无菌圆滤纸片、镊子、无菌水、无菌滴管、水浴锅、紫外线灯、黑纸、试管、接种针、温箱、刮铲、吸管、调温摇床、分光光度计。

（三）实验内容

环境因素包括物理因素、化学因素和生物因素，不良的环境条件使微生物的生长受到抑制，甚至导致菌体的死亡。我们可以通过控制环境条件，使有害微生物的生长繁殖受到抑制，甚至被杀死；而对有益微生物，通过调节理化因素，使其得到良好的生长繁殖或产生有经济价值的代谢产物。

根据微生物对氧气的需求，可把微生物分为好氧菌、厌氧菌和兼性好氧菌。在鉴定细菌时，常以它们的好氧性作为指标。

温度是影响微生物生长的重要因素之一。根据微生物生长的最适温度范围，可分为高温菌、中温菌和低温菌，自然界中绝大部分微生物属于中温菌。

实验项目三：酵母菌的直接计数3学时

（一）实验目的要求

了解血球计数板的构造和计数原理

掌握用血球计数板测定微生物细胞总数的方法

（二）实验材料和仪器设备

显微镜、载玻片、盖玻片、血球计算板、擦镜纸、吸水纸、玻片架、肾形盘、洗瓶、接种环、酒精灯、火柴、滴管。

（三）实验内容

（1）检查血球计数板

取血球计数板一块，先用显微镜检查计数板的计数室，看其是否沾有杂质或干涸着的菌体，若有污物则通过擦洗、冲洗，使其清洁。镜检清洗后的计数板，直至计数室无污物时才可使用。

（2）稀释样品

将培养后的酵母培养液振荡振摇混匀，然后作一定倍数的稀释。稀释度选择以小方格中的分布的菌体清晰可数为宜。一般以每小格内含4～5个菌体的稀释度为宜。

（3）加样

取出一块干净盖玻片盖在计数板中央。用滴管取1滴菌稀释悬液注入盖玻片边缘，让菌液自行渗入，若菌液太多可用吸水纸吸去。静置5—10分钟。

(4)镜检

待细胞不动后进行镜检计数。先用低倍镜找到计数室方格后，再用高倍镜测数。一般应取上下及中央五个中格的总菌数。计数时若遇到位于线上的菌体，一般只计数格上方（下方）及右方（左方）线上的菌体。每个样品重复3次。

(5)计算

取以上计数的平均值，按下列公式计算出每毫升菌液中的含菌量。

菌体细胞数（cfu/mL）＝小格内平均菌体细胞数×400×104×稀释倍数

实验项目四：污染葡萄酒中微生物培养3学时

（一）实验目的要求

了解微生物分